[發明專利]一種固態機械發酵生產木聚糖酶方法

無效

• 申請號: 200910075192.1
• 申請日: 2009-08-20
• 公開（公告）號: CN101638645A
• 公開（公告）日: 2010-02-03
• 發明（設計）人: 尤文武
• 申請（專利權）人: 承德避暑山莊企業集團有限責任公司
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12N15/01;C12N13/00;C12R1/685
• 代理公司: 石家莊冀科專利商標事務所有限公司
• 代理人: 李羨民;郭紹華

1.一種固態機械發酵生產木聚糖酶方法，其特征在于，它包括菌種培育、制備種子懸浮液、固態發酵、干燥和粉碎工藝，各工序按如下步驟進行：

a.菌種培育：出發菌株采用黑曲霉菌，采用平板透明圈及測酶活力的方法，從待測菌株中選出生產良好且產酶活力高的菌株；

b.配制培養基

斜面培養基：采用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基/PDA培養基；

固體發酵培養基的配制，原料采用麩皮、玉米芯粉、(NH₄)₂SO₄、MgSO₄.7H₂O、K₂HPO₄以及水，各原料按質量單位份計為：麩皮80；玉米芯20；(NH₄)₂SO₄?1.5；MgSO₄.7H₂O?0.15；K₂HPO₄?0.2；水100～200；pH為5.0。

C.滅菌器滅菌、物料輸送至固體發酵器中

木聚糖酶的生產首先在滅菌器內進行滅菌，將清洗后空消的滅菌器內放底水50升，攪拌，投入培養基物料后鎖緊罐蓋，通入空氣，將罐壓升至1.3-1.6kg/cm²，溫度120-125℃時保持40分鐘，降溫至80℃以下；

滅菌后的物料由無菌管道輸送到固體發酵器中，攪拌，使物料均勻攤鋪于篩盤表面，風冷，降溫，溫度達到28～30℃；

d.接種

物料達到工藝要求溫度后，停止通風，將種液噴灑到物料表面，經篩盤翻攪，物料全面均勻接觸種液，停止翻攪；利用攤刮出料機構使物料平整攤鋪在篩盤表面，使物料溫度一致、發酵菌體生長一致；

e.靜止培養、發酵

隨時監測發酵品溫，觀察生長情況；控制發酵器內溫度在28～30℃；噴灑補水保持物料含水量在60％左右；在生長旺盛期，生物熱高時啟動篩盤、翻攪工作，降低品溫。

f.干燥、粉碎

達到工藝生長要求，發酵結束，打開出料門，轉動篩盤，啟動出料機構，使物料從出料門均勻排出；發酵后的物料進行干燥，使含水量低于8％；干燥后的物料進行粉碎，粉碎粒徑在2毫米。

2.根據權利要求1所述的固態機械發酵生產木聚糖酶方法，其特征在于，在菌種培育工序，將選出的菌株進行誘變育種：

a.以篩選出來的高產菌株為出發菌株，在生長良好的純種斜面中加入10ml無菌水，洗下孢子，移入裝有玻璃珠和190m無菌水的三角瓶中，震蕩，將孢子充分散開，用脫脂棉過濾至另一無菌三角瓶中，用血球計數板計數，依次稀釋，調整孢子濃度為10⁶個/ml；

b.誘變處理：取10ml孢子懸液于φ90培養皿中，置于誘變箱的磁力攪拌器上，照射時間分別為0.05分鐘、1分鐘、2分鐘、3分鐘、4分鐘、6分鐘、8分鐘，各取1ml處理液經稀釋后，以每平板10-12菌落為宜，置于平皿中；

C.傾注法分離：取5種濃度稀釋度的孢子懸液各0.5ml進行分離，分別置于平皿中，待培養基冷至45-50℃，迅速注入平皿，搖勻，以使菌落分散；

d.長出菌落以后，將單個菌落分別挑到斜面上；

e.將各斜面菌株利用搖瓶液體發酵后，測其酶活力，選出產酶活力高的菌株即為所需生產菌種。

3.根據權利要求2所述的固態機械發酵生產木聚糖酶方法，其特征在于，所述滅菌后的物料輸送到固體發酵器中發酵時，其接種量選擇為10％。

4.根據權利要求3所述的固態機械發酵生產木聚糖酶方法，其特征在于，所述滅菌后的物料輸送到固體發酵器中發酵時，其發酵溫度選擇為28℃。

5.根據權利要求4所述的固態機械發酵生產木聚糖酶方法，其特征在于，所述滅菌后的物料輸送到固體發酵器中發酵時，物料層厚度選擇為20-25cm。