[發明專利]一種降解鄰甲基苯酚菌種的篩選方法

無效

• 申請號: 200910073100.6
• 申請日: 2009-10-27
• 公開（公告）號: CN101760504A
• 公開（公告）日: 2010-06-30
• 發明（設計）人: 方芳;韓洪軍;王偉
• 申請（專利權）人: 哈爾濱工業大學
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C02F3/34;C02F101/34
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 金永煥

技術領域

本發明涉及一種菌種的篩選方法。

背景技術

煤化工企業排放的廢水水質復雜，CODcr為2000～5000mg/L，BOD5/CODcr為0.25～0.4，總酚濃度為500～1200mg/L，揮發酚為150～300mg/L，氨氮為150～500mg/L，并含有少量的多環芳香族化合物、雜環化合物、石油烴和氰化物、硫化物等。在很多煤化工實際生產中產生的酚類物質可以占到總COD的一半以上，因此煤化工廢水處理效果的關鍵就在于酚類物質的處理。煤化工廢水中基本的酚類物質有苯酚，間苯二酚，鄰苯二酚，對苯二酚，間甲基苯酚，對甲基苯酚，鄰甲基苯酚，2-甲基-1，3-苯二酚，3-甲基-1和2-苯二酚，其中鄰甲基苯酚是最難被降解的物質之一。

目前降解鄰甲基苯酚使用的生物強化法，通常采用單一的酚作為碳源直接從菌群中篩選高效降解菌種，由于碳源的單一性，導致此方式獲得的菌株對煤化工廢水中其他化學物質的抗性低，在實際的煤化工廢水處理中，菌種的存活率低，無法實現菌種特有的降解性能，導致鄰甲基苯酚的降解率低，僅為30.5～51.8％，影響出水效果。

發明內容

本發明的目的是為了解決現有生物強化法篩選的菌株對煤化工廢水中其他化學物質的抗性低，導致鄰甲基苯酚的降解率低的問題，而提供一種降解鄰甲基苯酚菌種的篩選方法。

降解鄰甲基苯酚菌種的篩選方法按以下步驟實現：一、取煤化工好氧段廢水處理系統的污泥廢水混合物，在34～36℃下曝氣48～50h，然后按1∶5的體積比將曝氣后的污泥廢水混合物接種于混合酚濃度為400mg/L的培養基中，在34～36℃下震蕩培養18～24h后沉降30～40min，取上層菌液，然后向上層菌液中投加藥劑，攪拌均勻后在34～36℃下震蕩培養18～24h，得菌懸液a；二、按1∶20的體積比將菌懸液a接種于鄰甲基苯酚濃度為200mg/L的篩選培養基中，然后在34～36℃下震蕩培養18～24h，得培養物I；三、按1∶20的體積比將培養物I接種于鄰甲基苯酚濃度為400mg/L的篩選培養基中，然后在34～36℃下震蕩培養18～24h，得培養物II；四、按1∶20的體積比將培養物II接種于鄰甲基苯酚濃度為600mg/L的篩選培養基中，然后在34～36℃下震蕩培養18～24h，得培養物III；五、按1∶20的體積比將培養物III接種于鄰甲基苯酚濃度為800mg/L的篩選培養基中，然后在34～36℃下震蕩培養18～24h，得培養物IV；六、采用平板劃線分離法將培養物IV接種于富集培養基上，在34～36℃下震蕩培養18～24h，即得降解鄰甲基苯酚菌種；其中步驟一中混合酚濃度為400mg/L的培養基為每升培養基中由0.2gMgSO₄·H₂O、0.1gFeSO₄·H₂O、0.1gMnSO₄·H₂O、0.2gCaCl₂、0.5gK₂HPO₄、0.5gNH₂PO₄、0.45g(NH₄)₂SO₄、0.1gNaCl、400mg混合酚和余量的蒸餾水組成，并調節pH至6.9～7.1，混合酚由苯酚、甲基酚、二甲基苯酚和苯二酚按質量比30∶10∶10∶25混合而成；步驟一中投加藥劑的每升菌懸液a中有0.1～0.3g?MgSO₄·H₂O、0.05～0.1gFeSO₄·H₂O、0.05～0.1g?MnSO₄·H₂O、0.1～0.3g?CaCl₂、0.4～0.6g?K₂HPO₄、0.4～0.6gKH₂PO₄、0.4～0.5g(NH₄)₂SO₄、0.05～0.1g?NaCl和1.5～2.5g葡萄糖；步驟二中鄰甲基苯酚濃度為200mg/L的篩選培養基為每升培養基中由0.1～0.3gMgSO₄·H₂O、0.05～0.1gFeSO₄·H₂O、0.05～0.1gMnSO₄·H₂O、0.1～0.3gCaCl₂、0.4～0.6gK₂HPO₄、0.4～0.6gKH₂PO₄、0.4～0.5g(NH₄)₂SO₄、0.05～0.1gNaCl、200mg鄰甲基苯酚和余量的蒸餾水組成；步驟三中鄰甲基苯酚濃度為400mg/L的篩選培養基為每升培養基中由0.1～0.3gMgSO₄·H₂O、0.05～0.1gFeSO₄·H₂O、0.05～0.1gMnSO₄·H₂O、0.1～0.3gCaCl₂、0.4～0.6gK₂HPO₄、0.4～0.6gKH₂PO₄、0.4～0.5g(NH₄)₂SO₄、0.05～0.1gNaCl、400mg鄰甲基苯酚和余量的蒸餾水組成；步驟四中鄰甲基苯酚濃度為600mg/L的篩選培養基為每升培養基中由0.1～0.3gMgSO₄·H₂O、0.05～0.1gFeSO₄·H₂O、0.05～0.1gMnSO₄.H₂O、0.1～0.3gCaCl₂、0.4～0.6gK₂HPO₄、0.4～0.6gKH₂PO₄、0.4～0.5g(NH₄)₂SO₄、0.05～0.1gNaCl、600mg鄰甲基苯酚和余量的蒸餾水組成；步驟五中鄰甲基苯酚濃度為800mg/L的篩選培養基為每升培養基中由0.1～0.3gMgSO₄·H₂O、0.05～0.1gFeSO₄·H₂O、0.05～0.1gMnSO₄·H₂O、0.1～0.3gCaCl₂、0.4～0.6gK₂HPO₄、0.4～0.6gKH₂PO₄、0.4～0.5g(NH₄)₂SO₄、0.05～0.1gNaCl、800mg鄰甲基苯酚和余量的蒸餾水組成；步驟六中富集培養基由1000mL蒸餾水、4.5～5.5g牛肉膏、9～11g蛋白膝、19～21g瓊脂和4.5～5.5gNaCl制成，并調節pH至7.5～8.0。