[發明專利]轉基因抗旱大豆土壤環境安全評價方法

無效

• 申請號: 200910072986.2
• 申請日: 2009-09-28
• 公開（公告）號: CN101665819A
• 公開（公告）日: 2010-03-10
• 發明（設計）人: 丁偉;李文濱;閆春秀;王振華
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18;C12Q1/42;C12Q1/34;C12R1/065;C12R1/885;C12R1/11;C12R1/125;C12R1/645
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所屬技術領域

本發明涉及一種轉基因大豆環境安全評價方法，尤其是轉基因抗旱大豆土壤環境安全評價方法。

背景技術

轉基因大豆是把目的基因通過一定方法導入大豆后創制的大豆新品種。轉基因大豆從創制到生產中應用，需要經過環境和生物安全性評價，只有安全評價合格的轉基因大豆才能夠進入生產中應用。對轉基因作物商品化前的環境安全評價是防止轉基因作物大面積種植所可能帶來的對生態系統和人類生存潛在威脅的重要手段。中國在轉基因大豆新品種創制研究方面剛剛起步，轉基因抗旱大豆土壤環境評價方法是結合中國目前創制的自主知識產權的轉基因抗旱大豆而建立的土壤環境安全評價方法。

發明內容

轉基因大豆目前在歐盟、美國、加拿大已經廣泛種植，但目前種植的品種僅為轉基因抗除草劑大豆，因此歐美等國家所建立的轉基因大豆環境安全評價方法也只適用于對轉基因抗除草劑大豆的環境安全評價。轉基因抗旱大豆是為解決干旱這一制約中國大豆主產區產量和品質瓶頸問題而創制的，由于轉基因抗旱大豆與歐美等國目前種植的轉基因抗除草劑大豆導入的目的基因不同，因此歐美等國建立的轉基因抗除草劑大豆安全評價方法則不適合對我國自主研制的轉基因抗旱大豆進行環境安全性評價。本項發明提出轉基因抗旱大豆土壤環境安全評價方法，應用轉基因抗旱大豆土壤環境安全評價方法可檢測轉基因抗旱大豆種植后是否會對土壤功能微生物、病原微生物和土壤酶產生影響，對確保這一應用前景廣闊的轉基因抗旱大豆安全地投入生產，提高中國大豆生產的產量和品質具有重要作用。此外，本項方法也適用于對其他轉基因抗旱作物進行土壤環境的安全性評價。

本項發明解決其技術問題所采用的技術方案是：利用轉基因抗旱大豆根系提取物添加到培養基中，把已經從土壤中分離并鑒定的土壤功能微生物和病原微生物接種到上述培養基中培養，觀察并測定轉基因抗旱大豆根系分泌物對土壤功能微生物和病原微生物生長及其功能微生物所產生相應酶活性的影響。

本發明的有益效果是：在室內采用培養基中添加轉基因抗旱大豆根系提取物和適合微生物生長的純培養條件下，可以快速檢測轉基因抗旱大豆對土壤功能微生物、病原微生物生長和功能微生物所產生相應酶活性的影響。室內檢測，易于控制環境條件，準確且檢測周期短。該方法可為轉基因抗旱作物從研制到投入生產提供安全可靠的土壤環境評價方法，確保轉基因抗旱作物安全投入生產，并獲得最佳經濟效益。

具體實施方式

分別取轉基因抗旱大豆根系和同一品種非轉基因大豆根系100g勻漿后過濾，低溫冷凍離心機4000g下離心后取上清液置于4℃冰箱中保存備用。針對每種功能微生物和病原微生物分別配制適合其生長的選擇性培養基，在各選擇性培養基中分別添加上述轉基因抗旱大豆根系和同一品種非轉基因大豆根系提取物0，1％，0.1％，0.01％，0.001％，0.0001％后倒平板，5次重復。在倒平板后的每種不同的選擇性培養基中分別接種功能微生物如固氮菌、硅酸鹽細菌、木霉、巨大芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌等和大豆根部病原菌如疫霉菌。28℃～30℃條件下培養5～7天后測定各平板培養基中功能微生物和病原微生物菌落直徑，比對各功能菌和病原菌在含有轉基因抗旱大豆和同一品種非轉基因大豆根系提取物培養基中菌落直徑的差異顯著性，確定轉基因抗旱大豆對土壤功能微生物和病原微生物是否具有影響。

將上述接種各功能菌的選擇性培養基在28～30℃條件下繼續培養至10天后，在28℃～30℃條件下干燥后研細，測定每個培氧基中功能菌對應的酶活性，如脲酶、磷酸酶和纖維素酶活性。