[發(fā)明專利]一種從王不留行中分離制備具有增乳活性單體的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910072959.5
• 申請日: 2009-09-23
• 公開（公告）號: CN101648870A
• 公開（公告）日: 2010-02-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高學(xué)軍;佟慧麗;李慶章;秦君;黃建國
• 申請（專利權(quán)）人: 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C07C69/80
• 分類號: C07C69/80;C07C67/48;A23K1/16;A23K1/18
• 代理公司: 哈爾濱市哈科專利事務(wù)所有限責(zé)任公司
• 代理人: 崔東輝

1.一種從王不留行中分離制備具有增乳活性單體的方法，其特征在于：方法步驟如下：

步驟一：王不留行粗提取：取王不留行粗粉10kg，用體積分?jǐn)?shù)70％的乙醇加熱回流提取3次，每次2h，減壓回收溶劑，稀釋母液，依次以乙醚、乙酸乙酯萃取，獲得乙酸乙酯萃取部位；

步驟二：王不留行提取物活性部位的篩選：對乙酸乙酯部位進(jìn)行聚酰胺柱層析，干法上樣，分別用水，10％，30％，50％，70％，95％乙醇系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，收集不同梯度洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后獲得不同洗脫部位的中藥成分，通過其對奶牛乳腺上皮細(xì)胞泌乳模型細(xì)胞活力、乳糖及乳蛋白分泌能力的影響確立50％的乙醇洗脫部位為王不留行增乳活性部位；

步驟三：王不留行增乳單體的制備：對50％的有效部位進(jìn)行進(jìn)一步的分離純化，對聚酰胺柱層析分離獲得的50％乙醇洗脫部位進(jìn)行硅膠薄層層析，根據(jù)硅膠G板的薄層結(jié)果的Rf值情況選擇摸索不同的溶劑系統(tǒng)，最終確立石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng)為有效分離系統(tǒng)，采用石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng)對50％乙醇洗脫部位進(jìn)行硅膠柱層析，對分離的化合物進(jìn)行篩選，其中石油醚：乙酸乙酯20∶1的洗脫流分中含有一個具有增乳活性的單體成分；對該增乳單體化合物的制備采用分析型和制備型HPLC法進(jìn)行，采用10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％的甲醇對單體化合物的粗品進(jìn)行紫外全波長掃描進(jìn)行檢識，確立此化合物的紫外吸收波長為275nm，采用半制備型HPLC對化合物連續(xù)進(jìn)樣以純化并制備出高純度的目的化合物；

步驟四：增乳單體的結(jié)構(gòu)鑒定：采用紫外光譜、核磁共振氫譜、核磁共振碳譜、高分辨電噴霧質(zhì)譜(HR-ESI-MS)對目的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，以確定目的化合物的分子量、分子式及其具體結(jié)構(gòu)形式，鑒定結(jié)果確定目的化合物為鄰苯二甲酸二丁酯；制備出的鄰苯二甲酸二丁酯可以促進(jìn)體外培養(yǎng)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞乳糖和β-酪蛋白的分泌水平；且鄰苯二甲酸二丁酯制備的中藥單體注射液的動物試驗(yàn)結(jié)果表明其可以促進(jìn)小鼠和奶牛產(chǎn)奶量的提高。