[發(fā)明專利]一種抑制番茄灰霉病的粘帚霉菌菌株

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910072862.4
• 申請(qǐng)日: 2009-09-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101643705A
• 公開(kāi)（公告）日: 2010-02-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王傲雪;楊依軍;李景富;王迎春;陳秀玲;張麗莉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/14
• 分類號(hào): C12N1/14;A01P3/00;C12R1/645
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標(biāo)事務(wù)所
• 代理人: 何 強(qiáng)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種粘帚霉菌菌株。?

背景技術(shù)

番茄灰霉病是一種世界性番茄病害，也是番茄的主要病害。番茄灰霉病主要為害花果，亦可為害葉片與莖；幼果染病較重，柱頭和花瓣多先被侵染，后向果實(shí)轉(zhuǎn)移；果實(shí)多從果柄處向果面擴(kuò)展；致病果皮呈灰白色、軟腐，病部長(zhǎng)出大量灰綠色霉層，嚴(yán)重時(shí)果實(shí)脫落，失水后僵化；葉片染病，多從葉尖開(kāi)始，病斑呈“V”字形向內(nèi)擴(kuò)展，初水漬狀，淺褐色，有不明顯的深淺相間輪紋，潮濕時(shí)，病斑表面可產(chǎn)生灰霉，葉片枯死；莖染病，產(chǎn)生水漬狀小點(diǎn)，后迅速擴(kuò)展成長(zhǎng)橢圓形，潮濕時(shí)，表面生灰褐色霉層，嚴(yán)重時(shí)可引起病部以上植株枯死。遭受番茄灰霉病侵染的番茄一般減產(chǎn)20％～30％，有時(shí)減產(chǎn)高達(dá)50％左右，嚴(yán)重時(shí)甚至造成番茄絕產(chǎn)。?

番茄灰霉病病原菌是灰葡萄孢(Botrytis?cinerea)，該病原菌寄主范圍極廣，不僅危害番茄，還危害侵染黃瓜、葡萄、玫瑰等幾十科數(shù)百種植物，同時(shí)該菌還有極強(qiáng)的腐生能力，可以在離體的組織上或土壤中旺盛生長(zhǎng)。由于缺乏抗番茄灰霉病的番茄抗源材料，所以通過(guò)常規(guī)方法很難育成番茄灰霉病的抗性品種。長(zhǎng)期以來(lái)，灰霉病防治主要依賴多菌靈、速克靈等化學(xué)藥劑的使用；但由于病菌抗藥性迅速產(chǎn)生，其防治效果大大下降，并且嚴(yán)重污染農(nóng)產(chǎn)品和環(huán)境，危及人畜安全健康。?

隨著人們生活水平的不斷提高，對(duì)蔬菜產(chǎn)品的質(zhì)量要求也越來(lái)越高，無(wú)公害、綠色食品甚至有機(jī)食品逐漸成為蔬菜消費(fèi)市場(chǎng)的主流，因此，采用生物防治技術(shù)得到了廣泛的認(rèn)可。目前，利用粘帚霉(Bionectria?ochroleuca)菌防治、拮抗農(nóng)作物病害被視為最有效的手段。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了粘帚霉屬(Bionectria?ochroleuca)的一個(gè)菌株，可用于抑制番茄灰霉病，并對(duì)其它多種農(nóng)作物病害具有抑制效果，為生物防治番茄灰霉病和?利用生物技術(shù)培育番茄灰霉病抗性品種奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。?

本發(fā)明抑制番茄灰霉病的粘帚霉菌菌株為粉紅粘帚菌WY-1(Bionectria?ochroleuca?WY-1)，保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為CGMCC?No.1977。?

本發(fā)明中的粉紅粘帚菌WY-1(Bionectria?ochroleuca?WY-1)屬于半知菌亞門(Deuteromycotina)絲孢綱(Hyphomycetes)叢梗孢目(Moniliales)叢梗孢科(Moniliaceae)粘帚霉屬(Bionectria?ochroleuca)，對(duì)灰葡萄孢——即番茄灰霉病的主要病原具有明顯的拮抗作用。?

本發(fā)明粉紅粘帚菌WY-1由中國(guó)吉林省吉林市郊草炭土中分離、純化得到。將本發(fā)明粉紅粘帚菌WY-1接種到PDA固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，菌落由分枝狀菌絲組成，菌絲較粗而長(zhǎng)呈絨毛狀。菌落表面平滑呈扁平狀，有同心圓環(huán)和輕微的輻射狀溝紋(如圖1所示)。暗培養(yǎng)下該菌可產(chǎn)生黃色水溶性色素，在光照培養(yǎng)條件下，則為粉紅色或橘紅色。在顯微鏡下觀察，本發(fā)明粉紅粘帚菌WY-1菌絲分枝較多，無(wú)色具隔，菌絲較粗。本發(fā)明粉紅粘帚菌WY-1分生孢子(5μm～7μm)×(3.0μm～5.0μm)，表面光滑、帚狀枝常輪狀分枝3～4次；分枝末端產(chǎn)生分生孢子，無(wú)性孢子是單細(xì)胞的，長(zhǎng)卵形或圓柱形(如圖2和圖3所示)。本發(fā)明粉紅粘帚菌WY-1芽管無(wú)色，多數(shù)從分生孢子的一端長(zhǎng)出。?

本發(fā)明粉紅粘帚菌WY-1可在馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基、燕麥片瓊脂培養(yǎng)基、高氏1號(hào)培養(yǎng)基、玉米粉蛋白胨培養(yǎng)基、胡蘿卜培養(yǎng)基或孢子形成培養(yǎng)基上可以很好的生長(zhǎng)和產(chǎn)孢，其中最適培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基。可溶性淀粉為粉紅粘帚菌WY-1生長(zhǎng)和產(chǎn)孢的最佳碳源、適宜培養(yǎng)溫度為22℃～28℃、適宜培養(yǎng)pH值為5～6。黑暗條件有利于粉紅粘帚菌WY-1菌絲的生長(zhǎng)，而在光照條件下有利于粉紅粘帚菌WY-1產(chǎn)生分生孢子。溫度高于38℃或低于4℃環(huán)境中粉紅粘帚菌WY-1孢子均不能萌發(fā)，粉紅粘帚菌WY-1孢子的致死溫度為54℃，54℃處理10分鐘粉紅粘帚菌WY-1孢子的致死率達(dá)96.1％以上。本發(fā)明粉紅粘帚菌WY-1對(duì)人畜無(wú)毒無(wú)害，安全性高，加熱至56℃處理5分鐘致死率達(dá)100％。?

在溫度為22℃、pH值為5、以可溶性淀粉為碳源的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)粉紅粘帚菌WY-1?10天，然后將液體培養(yǎng)基接種到滅菌的麥粒上，光照培養(yǎng)12?天，晾干制成粉紅粘帚菌WY-1粉劑。本發(fā)明制成的粉紅粘帚菌WY-1粉劑性質(zhì)穩(wěn)定，制作簡(jiǎn)單，成本低廉，易于保存。?