[發明專利]好食脈孢霉及由該好食脈孢霉培制纖溶酶的方法

有效

• 申請號: 200910072630.9
• 申請日: 2009-07-30
• 公開（公告）號: CN101701191A
• 公開（公告）日: 2010-05-05
• 發明（設計）人: 劉曉蘭;鄭喜群;鄭宏臣;鄧永平
• 申請（專利權）人: 齊齊哈爾大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N9/68;C12R1/645
• 代理公司: 齊齊哈爾鶴城專利事務所 23207
• 代理人: 劉麗

技術領域

本發明涉及一種好食脈孢霉，本發明還涉及一種由該好食脈孢霉培制纖溶酶的方法。?

背景技術

血栓類疾病嚴重的威脅著人類的生命和健康，是導致當今人類死亡的最主要原因之一，而且這種病的發病率目前仍然在逐年上升。溶栓療法是當前血栓疾病的一種最常用的治療手段，所使用的溶栓劑現在已經發展到了第三代，從自然界各種生物資源中開發溶栓物質是這一代溶栓劑產品研發的重要途徑。本申請人于1999年3月篩選到了一種具有優良溶栓性能的好食脈孢霉菌株，該菌株已由本申請人于2006年10月19日向中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)提供了保藏，分類學命名為好食脈孢霉(N.sitophila)菌株17號，保藏號為CGMCC?No.1836。利用該菌株本申請人培養出了一種具有良好溶栓性能的纖溶酶，并于2006年12月14日向國家知識產權局提交了申請號為200610163479.6的發明專利申請。該發明申請中的纖溶酶具有如下特征：“經SDS-PAGE法和凝膠過濾層析法的分析測定，被證實該纖溶酶酶分子由兩個亞基組成，相對分子量分別為30000和15500，IEF測定等電點為7.9±0.2。該纖溶酶酶分子有直接溶解纖維蛋白和激活纖溶酶原間接溶解纖維蛋白的作用，可以順次降解纖維蛋白原α、β和γ鏈。還可以水解生色底物N-Succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA，測得的酶促反應的米氏常數為0.24mmol/L；該纖溶酶不降解人血清蛋白，最適作用pH為7.4，適宜在人體?生理pH下發揮作用，在pH4.8-9.8范圍內37℃保溫24h后酶活力保持在80％以上；最適作用溫度為50℃，在32℃-42℃保溫4h酶活力保持在75％以上；Fe²⁺和Fe³⁺在離子濃度為0.5mmol/L時對酶的活性有激活作用，該纖溶活性受絲氨酸蛋白酶抑制劑的抑制。”好食脈孢霉(N.sitophila)17號菌株是一種很難得的優良菌種，在制備該纖溶酶過程中還分離到一種理化性質與該纖溶酶完全不同的纖溶酶，本發明內容屬于對該項目的繼續研究。?

發明內容

本發明要解決的技術是提供一種好食脈孢霉菌株發酵產生的纖溶酶，該纖溶酶不僅具有很好的溶栓性能，而且使用上安全性好，相對分子量小，易于人體吸收，制備成本也很低廉。本發明要解決的另一個技術問題是提供一種由該好食脈孢霉培制制纖溶酶的方法。?

本發明的好食脈孢霉是本申請人于1999年3月在中國北方醬類食品發酵中間產物醬塊中分離、篩選得到的，為一種具有良好溶栓性能的好食脈孢霉菌株，該菌株已由本申請人于2006年10月19日向中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)提供了保藏，分類學命名為好食脈孢霉(N.sitophila)菌株17號，保藏號為CGMCC?No.1836。脈孢霉廣泛分布在自然界土壤中、禾本科植物上以及富含淀粉的食物上。此脈孢霉屬于好氧微生物，氧氣充足時，孢子形成迅速。最適生長pH為5～7.5。25～36℃下生長最快，菌落最初白色，成叢，很快變為淡黃色，絨毛狀。菌絲蔓延生長，有橫隔。菌落成熟后，上層覆蓋成團塊的分生孢子。分生孢子球形或近似球形，成鏈，橙紅色。?

本發明產品的培制方法是以微生物好食脈孢霉(N.sitophila)菌株17號為菌種，經淺盤固體發酵培養產生纖溶酶，將發酵物用生理鹽水浸提6h，濾去菌體和固形物，收集濾過液，用40％～80％(W/V)飽和度的硫酸銨分級鹽?

在本發明的技術方案中，Ca²⁺、Mg²⁺、Na⁺、Mn²⁺、K⁺、Zn²⁺對本發明的纖溶酶都有不同程度激活作用。?

圖1一級MS譜圖I?

圖2一級MS譜圖II?

附圖說明

圖3一級MS譜圖III?

圖4二級MS譜圖I?

圖5二級MS譜圖II?

圖6為利用血纖維蛋白平板法證實本發明產品纖溶酶溶纖作用的圖片?

圖7為SDS-PAGE測定本發明產品纖溶酶對人血纖維蛋白原的降解圖片?

本發明所使用的菌種好食脈孢霉(N.sitophila)17號已由本申請人于2006年10月19日向中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)提供了保藏，保藏號為CGMCC?No.1836。?

實施例1：?