[發明專利]一種低分子肝素的基團修飾方法

有效

• 申請號: 200910071971.4
• 申請日: 2009-05-07
• 公開（公告）號: CN101597343A
• 公開（公告）日: 2009-12-09
• 發明（設計）人: 張麗萍;李雷剛;崔素萍;劉妍妍;魏文義;賈健;李良玉
• 申請（專利權）人: 張麗萍
• 主分類號: C08B37/10
• 分類號: C08B37/10
• 代理公司: 大慶禹奧專利事務所
• 代理人: 朱士文;楊曉梅

技術領域：

本發明涉及一種抗凝血藥物天然低分子肝素的基團修飾方法。

背景技術：

低分子肝素作為一種重要的抗凝血藥物，是由肝素經化學法、酶法或物理法降解或分離得到的分子量在3000～8000Da的糖氨聚糖片段。與傳統的肝素相比，低分子肝素具有抗血栓作用強、出血副作用小、生物利用度高、血漿半衰期長等優點，在國際市場上已開始逐漸取代肝素。

肝素主要來源于畜禽副產物中的豬小腸黏膜、牛肺等，并且我國是國際上最主要的肝素供應國，肝素鈉是我國最重要的創匯產品之一，80％的粗品或精品肝素出口到美國和德國。但我國應用的低分子肝素主要依靠進口，是由國外將肝素鈉再行降解形成低分子肝素后再輸入到我國。目前臨床上用于抗血栓的藥劑主要是低分子肝素制劑，據IMS統計，2004年肝素市場的全球銷售額已突破40億美元，其中低分子肝素制劑在肝素制劑銷售額的比例也逐年上升，目前遞增率已達到85％以上。2004年我國低分子肝素制劑的銷售額達到了3.5億人民幣。因此，不斷完善從粗品原料到精品再到成品制劑完備的產業鏈，研究低分子肝素制備技術的提升、創新將具有重要的經濟意義和社會效益。

盡管我國畜禽副產物極為豐富，但目前其綜合利用、精深加工水平和技術裝備落后；另外，目前天然低分子肝素的制備方法都存在著生產成本高、效率低、環境污染大、不符合藥典標準、產品毒副作用大、活性低等缺陷。

發明內容：

為解決背景技術中的不足，本發明提供一種低分子肝素的基團修飾方法，應用該方法使低分子肝素的活性得到了提高。

本發明所采用的技術方案內容是：該低分子肝素的基團修飾方法以亞硝酸鈉降解所得的低分子肝素為原料，按如下步驟進行基團修飾：將所述的低分子肝素添加到氯磺酸-吡啶酯化試劑中，通過不同溫度、時間、酯化試劑比例反應條件控制硫酸基的取代度。

上述的溫度為15℃～25℃，時間為1h～2.5h，酯化試劑與低分子肝素量比例為10∶1(體積質量比)，酯化試劑氯磺酸與吡啶的體積比為1∶1；溫度為20℃，時間為2.5h。

本發明的有益效果是：經過基團修飾后的抗凝血藥物天然低分子肝素使低分子肝素的活性得到了提高。并具有以下特點：(1)抗FXa強，抗F?II?a弱，抗血栓作用強，出血副作用小；(2)分子量小，生物利用度高，血漿半衰期長；(3)不與肝素結合蛋白結合，因此量效關系穩定，按體重給藥，控制劑量，不需要進行實驗室監測；(4)較少與血小板結合，不易引起血小板減少。

附圖說明：

圖1是反應溫度對取代度的影響的關系曲線圖；

圖2是反應時間對取代度的影響的關系曲線圖；

圖3是酯化試劑比對取代度的影響的關系曲線圖；

圖4是硫酸基測定標準曲線圖；

圖5是低分子肝素標準品紅外光譜圖；

圖6是修飾后低分子肝素紅外光譜圖。

具體實施方式：

下面結合實施例對本發明作進一步說明：

實施例1、反應溫度是Wolfrom法中影響取代度的的重要因素，首先對反應溫度的影響范圍進行了單因素試驗，其它兩個因素反應時間和酯化試劑比例分別為2h和1∶1，試驗結果見圖1。由圖1可知，隨著反應溫度的升高，取代度呈不斷升高的趨勢，主要是因為溫度升高使各官能團更易于被取代，從而使低分子肝素的取代度提高，但取代度并不隨著溫度的升高不斷增加，當溫度超25℃時取代度反而下降，主要與低分子肝素可被硫酸基取代的官能團的數量有關。在反應溫度繼續升高時，反應劇烈程度增加，在添加酯化試劑過程中冒出大量的黃色三氧化硫煙霧，同時導致LMWH結構的破壞，影響其活性，故反應溫度應控制在25℃以下為宜。

實施例2、在進行了反應溫度對取代度的影響作用以后，繼續對反應時間的影響作用進行了試驗分析，反應溫度為15℃，酯化試劑比為1∶1，試驗水平數為五個，試驗結果見圖2。根據不同反應時間對取代度的影響結果及圖2可知：隨著反應時間的延長，取代度不斷增加。但超2.5h后，取代度反而有所下降，主要與LMWH的結構有關，在LMWH主體結構中共有3個可以取代的基團，反應時間延長后已添加的硫酸基團可能被其它基團所取代，導致取代度的下降。所以時間為1h～2.5h為宜。