[發(fā)明專利]亞麻單倍體細胞懸浮系培養(yǎng)基

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910071778.0
• 申請日: 2009-04-15
• 公開（公告）號: CN101531990A
• 公開（公告）日: 2009-09-16
• 發(fā)明（設計）人: 宋淑敏
• 申請（專利權）人: 黑龍江省科學院亞麻綜合利用研究所
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;C12N5/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明涉及生物技術領域，具體涉及亞麻單倍體細胞懸浮系培養(yǎng)基。

背景技術

隨著我國亞麻花藥培養(yǎng)研究的不斷進展，花藥培養(yǎng)技術已應用于亞麻抗性育種領域。利用單倍體細胞繼代培養(yǎng)過程中產生的高頻率變異，可在細胞水平上篩選各類型突變體。由于產生突變的單倍體，只有一套染色體，所以不產生嵌合體，顯性和隱性的突變形狀同時表達，而且突變形狀穩(wěn)定，可加快抗性育種進程。目前，細胞懸浮培養(yǎng)已在抗性細胞篩選中廣泛應用，通過細胞懸浮培養(yǎng)可以得到單細胞群體，在誘變劑和選擇劑作用時比較均勻，不易產生嵌合體。G.Melchers(1959)在金魚草懸浮細胞培養(yǎng)物中得到了溫度突變體.Zenk(1974)從單倍體煙草的細胞懸浮培養(yǎng)物篩選出抗2.4-D的細胞系。在亞麻抗性突變體篩選研究中多采用愈傷組織為篩選材料，由于愈傷組織在突變體篩選過程中，并非所有的細胞都能與培養(yǎng)基直接接觸，從而使細胞不能均勻地受到選擇壓力的作用，不利于突變體的篩選。N₆、B₅、MS懸浮培養(yǎng)基中亞麻花粉愈傷組織分散性不好，雖然細胞增殖速度較快，但獲得的單細胞數量少，細胞團的比重較大。

發(fā)明內容

本發(fā)明為了解決現有在亞麻抗性突變體篩選中多采用愈傷組織為篩選材料，由于愈傷組織在突變體篩選過程中，由于細胞不能全部與培養(yǎng)基直接接觸，從而使細胞不能均勻地受到選擇壓力的作用，不利于突變體的篩選；N₆、B₅、MS懸浮培養(yǎng)基中花粉愈傷組織的分散性不好，雖然細胞增殖速度較快，但獲得的單細胞數量少，細胞團的比重較大的問題，提供了一種亞麻單倍體細胞懸浮系培養(yǎng)基，解決該問題的具體技術方案如下：

本發(fā)明的亞麻單倍體細胞懸浮系培養(yǎng)基(YHX)由1/2N₆大量元素、B₅微量元素、維生素、氨基酸、植物激素、添加活性炭、蔗糖和溶劑合成，其每升培養(yǎng)基中按重量由1/2N₆大量元素2186.1mg、B₅微量元素15.8mg、鹽酸硫胺素1～20mg、鹽酸吡哆素1～10mg、脯氨酸100～300mg、谷氨酰胺100～500mg、活性炭10～50mg、2.4--D1.0mg、6--BA0.1mg、蔗糖20～40g和余量為蒸餾水合成；合成后培養(yǎng)基的PH值為5.5～6.0。

1/2N₆大量元素成分按重量由：硝酸鉀1415mg、硫酸銨231mg、硫酸鎂92mg、氯化鈣83mg、磷酸二氫鉀200mg、硫酸亞鐵27.8mg、乙二胺四乙酸二鈉37.3mg和肌醇100mg構成。

B₅微量元素成分按重量由：硫酸錳10mg、硼酸3mg、碘化鉀0.75mg、硫酸鋅2mg、硫酸銅0.025mg和氯化鈷0.025mg構成。

本發(fā)明在培養(yǎng)基中添加了10～50mg/L的活性炭，不僅可以促進單倍體細胞的發(fā)育，而且可以清除細胞在培養(yǎng)過程中產生的毒副作用物質。將亞麻花粉愈傷組織轉入培養(yǎng)基(YHX)中進行懸浮培養(yǎng)，與其它培養(yǎng)基相比，不僅分散性好，而且獲得的單細胞較多，懸浮培養(yǎng)3天，細胞開始分裂，最終獲得的單倍體胚性細胞色澤鮮黃、細胞分裂旺盛、分散性好和細胞團的比重小；本發(fā)明能大幅度提高胚性愈傷組織誘導率，經再生的愈傷組織結構緊密，成小球狀，表面有小顆粒結構。

具體實施方式

具體實施方式一：本實施方式由1/2N₆大量元素、B₅微量元素、維生素、氨基酸、植物激素、添加活性炭、蔗糖和溶劑合成，其每升培養(yǎng)基中的濃度按重量由1/2N₆大量元素2186.1mg、B₅微量元素15.8mg、鹽酸硫胺素1～20mg、鹽酸吡哆素1～10mg、脯氨酸100～300mg、谷氨酰胺100～500mg、活性炭10～50mg、2.4-D1.0mg、6-BA0.1mg、蔗糖20～40g和余量為蒸餾水合成；合成后培養(yǎng)基的PH值為5.5～6.0。

亞麻單倍體細胞懸浮系培養(yǎng)基是建立單倍體細胞懸浮系的關鍵因子。