[發(fā)明專利]氯化染料木素及其生物轉(zhuǎn)化制備和應(yīng)用方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910071631.1
• 申請(qǐng)日: 2009-03-25
• 公開（公告）號(hào): CN101619055A
• 公開（公告）日: 2010-01-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 向文勝;張繼;王相晶;姜玲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C07D311/36
• 分類號(hào): C07D311/36;C12P17/06;A61K31/352;A61P39/06;A61P35/00;G01N21/31;C12R1/045
• 代理公司: 哈爾濱市哈科專利事務(wù)所有限責(zé)任公司
• 代理人: 劉 婭

1.一種制備氯化染料木素的生物轉(zhuǎn)化制備方法，其特征在于， 包括以下步驟：

A)將染料木素/染料木苷直接作為底物加入到培養(yǎng)基中與游動(dòng)放線菌 Actinoplanes?sp.HBDN08共培養(yǎng)中或?qū)⒑腥玖夏舅?染料木苷的碳氮源物質(zhì) 的培養(yǎng)基與游動(dòng)放線菌Actinoplanes?sp.HBDN08共培養(yǎng)；

B)利用高壓液相層析或萃取/硅膠層析方法分離純化獲得產(chǎn)物；

該方法制得的一種氯化異黃酮類化合物8-氯染料木素，3’，8-雙氯染料木素， 結(jié)構(gòu)式如下：

8-氯染料木素：R＝H；????????3’8-雙氯染料木素：R＝Cl。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的氯化染料木素的生物轉(zhuǎn)化制備方法，其特征在于：所 述的放線菌Actinoplanes?sp.HBDN08為從土壤中分離得到的，是于2009年03 月11日保藏于“中國(guó)生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心”，保藏登記號(hào) 為：CGMCC?NO.2944，命名為HBDN08?Actinoplanes?sp.的菌株。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的氯化染料木素的生物轉(zhuǎn)化制備方法，其特征在于：所 述的放線菌Actinoplanes?sp.HBDN?08的DNA序列為：

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4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的氯化染料木素的生物轉(zhuǎn)化制備方法，其特征在于，包 括以下步驟：

游動(dòng)放線菌Actinoplanes?sp.HBDN08在種子培養(yǎng)2天后以體積百分比為 4％的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，在28℃條件下250rpm振蕩培養(yǎng)6天，發(fā)酵結(jié) 束后取樣測(cè)定氯化染料木素的濃度；其涉及的詳細(xì)步驟如下：

(1)斜面培養(yǎng)：將游動(dòng)放線菌Actinoplanes?sp.HBDN08接種到固體斜面培 養(yǎng)基上，28℃條件下，靜置培養(yǎng)6天；

(2)制備種子培養(yǎng)液：用步驟(1)所得到的斜面培養(yǎng)物，接種到液體種子 培養(yǎng)基中，在28℃條件下，250rpm培養(yǎng)2天，制得種子培養(yǎng)液；

(3)轉(zhuǎn)化：使用步驟(2)所得的種子培養(yǎng)液，按體積百分比4％的接種量接 入轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，在28℃條件下，250rpm培養(yǎng)6天；

(4)氯化染料木素的檢測(cè)：轉(zhuǎn)化結(jié)束后4000r/min離心收集上清液及細(xì)胞 沉淀，上清液經(jīng)乙酸乙酯萃取，細(xì)胞沉淀加入3倍體積的甲醇浸泡過夜， 將乙酸乙酯萃取液和甲醇浸泡液合并，真空干燥后溶于乙醇中，經(jīng)反相 高效液相色譜儀測(cè)定氯化染料木素的含量，計(jì)算8-氯染料木素及3’，8- 雙氯染料木素的轉(zhuǎn)化率分別為76.8％和12.8％；

在上述利用該游動(dòng)放線菌轉(zhuǎn)化生產(chǎn)氯化染料木素的方法中，固體斜面培養(yǎng)基 配方為：可溶性淀粉10g/L，酵母膏4g/L，水解酪蛋白3g/L，K₂HPO₄·3H₂O?0.5 g/L，MgSO₄·7H₂O?0.5g/L，瓊脂20g/L，pH?7.2，120℃滅菌20分鐘；

在上述利用該游動(dòng)放線菌轉(zhuǎn)化生產(chǎn)氯化染料木素的方法中，液體種子培養(yǎng)基 配方為：玉米淀粉24g/L，酵母膏5g/L，牛肉膏3g/L，蛋白胨5g/L，葡 萄糖1g/L，碳酸鈣4g/L，pH?7.0，裝液量為250ml三角瓶裝液25ml，120℃ 滅菌20分鐘；

在上述利用該游動(dòng)放線菌轉(zhuǎn)化生產(chǎn)氯化染料木素的方法中，轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基配方 為：可溶性淀粉50g/L，葡萄糖20g/L，黃豆餅粉30g/L，氯化鈉3g/L， 碳酸鈣8g/L，pH?7.2，裝液量為250ml三角瓶裝液25ml，120℃滅菌20分 鐘，培養(yǎng)基中的黃豆餅粉可被其它含有染料木素/染料木苷的碳氮源所代替。