[發明專利]一種降解木質纖維素類生物質產氫細菌的篩選方法

有效

• 申請號: 200910071455.1
• 申請日: 2009-02-27
• 公開（公告）號: CN101492652A
• 公開（公告）日: 2009-07-29
• 發明（設計）人: 王愛杰;高靈芳;任南琪;劉充;許繼飛;曹廣麗
• 申請（專利權）人: 哈爾濱工業大學
• 主分類號: C12N1/22
• 分類號: C12N1/22;C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所
• 代理人: 金永煥

1.一種降解木質纖維素類生物質產氫細菌的篩選方法，其特征在于降解木質纖維素類生物質產氫細菌的篩選方法按以下步驟實現：a、取10g牛糞堆肥樣品放入三角瓶中，加入生理鹽水和數顆玻璃珠，在搖床上振蕩30min，然后取1mL上清液接種于CM3纖維素濾紙培養基中靜置培養一周，得菌體富集液；b、取1mL菌體富集液用厭氧的無菌水進行倍比稀釋，再接種于CM3纖維素粉末固體培養基中，制成滾管，分離培養5～7天，然后挑取水解透明圈菌落轉接于CM3纖維素濾紙培養基中純化培養3～4天，得純菌株；c、純菌株接種于CM3纖維素粉末固體培養基中，制成滾管，分離培養5～7天，然后挑取水解透明圈菌落轉接于CM3纖維素濾紙培養基中純化培養3～4天，再轉接于CM3纖維二糖固體培養基中培養至得到單一菌落；d、將單一菌落接種于CM3纖維素粉末液體培養基中，在37℃、130r/min的條件下振蕩培養一周后檢測氣相，有氫氣產生的即為降解木質纖維素類生物質產氫細菌；其中步驟a中生理鹽水為充入無菌氮氣的生理鹽水；步驟a中CM3纖維素濾紙培養基是在改良CM3培養基中加入濾紙條；步驟b中CM3纖維素粉固體培養基是在改良CM3瓊脂培養基中加入纖維素粉；步驟c中CM3纖維二糖固體培養基是在改良CM3瓊脂培養基中加入纖維二糖；步驟d中CM3纖維素粉液體培養基是在改良CM3培養基中加入pH-101纖維素粉；步驟a中的改良CM3培養基每1000mL由1.5g的KH₂PO₄、4.2g的Na₂HPO₄·12H₂O、0.5g的NH₄Cl、0.18g的MgCl₂·6H₂O、2.0g的酵母浸粉、0.5g的還原劑L-半胱氨酸、2.00mL質量濃度為0.1％的氧化還原電位指示劑、10mL的微量元素液和余量的水組成，pH值為6.8～7.2；所述的微量元素液每1000mL由0.01g的維生素B₁₂、0.025g的抗壞血酸、0.025g的核黃素、0.02g的檸檬酸、0.05g的吡多辛、0.01g的葉酸、0.01g的對氨基苯甲酸、0.025g的肌酸、0.01g的MnSO₄·7H₂O、0.05g的ZnSO₄·7H₂O、0.01g的H₃BO₃、0.01g的N(CH₂COOH)₃、0.01g的CaCl₂·2H₂O、0.01g的Na₂MoO₄、0.2g的CoCl₂·6H₂O、0.01g的AlK(SO₄)₂和余量的水組成；步驟a中濾紙條為經過處理的濾紙裁剪而成，即采用質量濃度為1％的醋酸浸泡濾紙條24h，然后用碘液檢查確定無淀粉后，再用質量濃度為2％的蘇打水沖洗濾紙條至中性，晾干后裁剪。

2.根據權利要求1所述的一種降解木質纖維素類生物質產氫細菌的篩選方法，其特征在于步驟b中的改良CM3瓊脂培養基是在改良CM3培養基中加入瓊脂。