[發明專利]基于免疫法的食品中獸藥和飼料添加劑殘留檢測的方法

無效

• 申請號: 200910070801.4
• 申請日: 2009-10-14
• 公開（公告）號: CN101694493A
• 公開（公告）日: 2010-04-14
• 發明（設計）人: 劉瑾;徐可欣;林旺;張婉潔;蘇洋
• 申請（專利權）人: 天津大學
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 宋潔瑾

技術領域

本發明涉及一種食品中獸藥和飼料添加劑殘留檢測的精確定量方法，特別是涉及采用免疫法測量多種獸藥和飼料添加劑混合殘留的情況下，且測量用抗體與多種殘留物間存在交叉反應時的各組分精確定量方法。

背景技術

現在食品安全中有害物質的殘留是一項突出的問題，尤其是動物源性食品，如肉類、禽類、奶、蛋等等，其在人們日常膳食結構中所占比例越來越大。動物源性食品的安全問題主要包括獸藥殘留、飼料添加劑殘留、工業廢物的污染、病原微生物及寄生蟲感染等。本發明針對基于免疫法的獸藥和飼料添加劑殘留的檢測方法進行改進。

動物源性食品中常見的獸藥和飼料添加劑來源有很多。一是濫用獸藥，如磺胺類藥物等等；二是惡意添加的化學物質，如鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇、類固醇激素、蘇丹紅、三聚氰胺等等；三是治療用抗生素殘留，如青霉素、四環素、氯霉素等等。這些殘留對人體健康造成很大的危害。隨著食品安全法的實施，我國大大加強了監管和監測的力度。

現在針對這些獸藥和飼料添加劑的檢測方法有很多，國家標準也有相應的規定。例如抗生素的殘留，采用微生物測定法；三聚氰胺的檢測采用液相色譜法；瘦肉精采用色譜與質譜聯用的方法等等。這些檢測技術均比較復雜、耗時長，不適宜多樣本的快速檢測。因此，為了適應實際應用場合的需要，一些快速檢測的新技術得到了發展。其中最具代表的就是基于免疫法的檢測技術，其檢測速度快、精度高。具體包括酶聯免疫法、免疫層析法、免疫生物傳感器等等。大量基于免疫法的產品也相應產生，主要是免疫試紙和免疫試劑盒。這些檢測技術采用殘留物與其抗體的特異性反應，能夠快速、準確的檢測出食品中的殘留，檢測限也遠遠滿足國家標準的規定。酶聯免疫法的發展最為迅速和廣泛，針對各種有害殘留物的檢測試劑盒都在商品化出售。

以免疫法為基礎的檢測技術，均利用了被測物質與其相應抗體的特異性結合作用，其原理的不同只是在于，當兩者的吸附作用發生時，各種方法引起的檢測信號改變的不同。例如酶聯免疫法，其原理是將抗體或抗原進行酶標記，通過檢測酶與底物的顯色反應，間接的反應抗體與被測物的結合情況；熒光免疫法是對抗體或抗原進行熒光色素標記，通過檢測熒光物質的量，反映抗體與被測物結合的量；放射免疫技術是采用放射性核素對抗體或抗原進行標記，通過檢測放射性核素的量間接檢測抗體與被測物的結合；而基于表面等離子體共振的免疫傳感器其原理是通過光學信號的變化反應被測物與抗體的結合。可以看出，諸多的免疫檢測技術均是基于被測物與其抗體的特異性結合作用，需要用到抗體為耗材，因此這種檢測技術勢必受到抗體制備技術發展的限制。由于有些現有技術所制備抗體與多種抗原存在交叉反應，因此，免疫法存在無法精確測量多種混合殘留物的弊病。

以磺胺類藥物為例，具體包括：磺胺甲基異惡唑(SMZ)、磺胺異唑(SIZ)、磺胺喹惡啉(SQ)、磺胺脒(SG)、酞酰磺胺噻唑(PST)、琥珀酰磺胺噻唑(SST)等等。這些藥物均是氨苯磺胺的衍生物，具有相似的化學結構式，因此，以其中某個藥物作為抗原所制備出的抗體對該藥物以外的其他磺胺類藥物也有交叉反應，交叉反應率很高，10％-200％不等。因此，采用某種抗體進行檢測時，無法區分具體的磺胺藥物。抗生素的檢測也是類似，在同族的抗生素中，各個抗生素具有相似的結構。例如β-內酰胺類抗生素，其化學結構式都含有一個β-內酰胺環，具體有青霉素G、氨芐青霉素、羥氨芐青霉素、頭孢菌素、頭孢氨芐等等；氨基糖苷類抗生素，其化學結構式均是以氨基環醇與氨基糖縮合而成的苷，具體有鏈霉素、卡那霉素、慶大霉素等等；大環內酯類抗生素均含一個大環內酯作為配糖體，以苷鍵和1～3個糖相連，具體有紅霉素、白霉素等等；四環類抗生素以四并苯為母核，有四環素、土霉素等等。由于化學結構式的相似，同類抗生素的抗原決定簇往往也相同或相似，因此，同類抗生素的抗體也具有交叉反應。類似的還有其他添加劑，例如沙丁胺醇、克倫特羅、特布他林等，其均屬于β-興奮劑，具有相似的化學結構，其抗體往往對這些物質均有交叉反應，如有的公司制備的沙丁胺醇抗體對克倫特羅的交叉反應率達到13％。

因此，當被測食品中含有多種相似化學結構的殘留物時，采用免疫法檢測，某一種抗體可能與多種殘留物均發生特異性結合，并且該抗體對不同的殘留物的反應效率也不同，這些復雜的情況導致無法精確的測量出單個殘留物的含量，總量測定也不準確。