[發明專利]果蠅抗腫瘤活性蛋白rd-1的高效異源表達工藝

無效

• 申請號: 200910070110.4
• 申請日: 2009-08-11
• 公開（公告）號: CN101624600A
• 公開（公告）日: 2010-01-13
• 發明（設計）人: 陸建新
• 申請（專利權）人: 陸建新
• 主分類號: C12N15/81
• 分類號: C12N15/81;C12P21/02;C07K14/435;A61P35/00;C12R1/84
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

果蠅抗腫瘤活性蛋白rd-1的高效異源表達工藝其特征在于它是通過下述步驟實現的：

(1)通過SepharoseCL-4B親和層析柱，并運用0.2M?D-半乳糖進行洗脫提取rd-1蛋白并對N端和C端測序；

(2)根據測序結果設計并合成簡并引物或核酸探針；

(3)采用SMART方法構建果蠅蛹cDNA文庫；

(4)通過PCR方法或核酸雜交方法從果蠅蛹cDNA文庫獲得rd-1蛋白全基因；

(5)將rd-1基因和表達載體連接構建重組表達載體；

(6)將重組表達載體轉入畢赤酵母進行異源表達；

(7)對重組比赤腳酵母進行發酵條件優化以期得到高水平的表達，確定最優發酵條件為甘油添加量為4％，YNB添加量為1.25％，培養基pH6.0，甲醇誘導濃度1％，發酵時間84h；

上述步驟(7)得到的發酵液上清離心取上清，并進行凝膠柱分離，去除發酵液中少量雜蛋白，最終通過冷凍干燥技術制成rd-1蛋白凍干粉。

2、根據權利要求1所說的果蠅抗腫瘤活性蛋白rd-1的高效異源表達工藝，其特征在于所說的步驟(7)制得的rd-1蛋白凍干粉。

3、一種根據權利要求1發酵產的rd-1蛋白，其特征是：白色無味粉末。

該蛋白理化性質為：球蛋白，直徑8nm，帶糖鏈，有beta?1，4糖苷鍵特異性并可被Schiff’s試劑染色分子量：45kDa，結構：已有N端C端序列已測，沒有4級結構，等電點：6.2、溫度：65度以上失活、pH：4-8內穩定、金屬離子：Fe³⁺and?Mn²⁺在濃度3-12nM時候會使其失活，其他沒有影響。