[發明專利]一種用于檢測白血病易感的基因組合、引物、探針和用途

無效

• 申請號: 200910069888.3
• 申請日: 2009-07-24
• 公開（公告）號: CN101962670A
• 公開（公告）日: 2011-02-02
• 發明（設計）人: 楊亞非
• 申請（專利權）人: 南京微宇基因工程有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 天津才智專利商標代理有限公司 12108
• 代理人: 王曉紅

技術領域

本發明涉及一種基因組合、引物、探針和用途，尤其是一種用于檢測白血病易感的基因組合、引物、探針和用途。

背景技術

白血病在我國人群中發病率高，是兒童和青年最常見的惡性腫瘤。近年來其發病率呈上升趨勢，病因至今尚未闡明。目前公認的觀點是白血病是環境-基因相互作用引起的。基因方面涉及代謝、DNA損傷修復基因等的變異。研究發現，致癌物代謝通路中的代謝酶家族在人群中呈多態性，不同個體對特定致癌物的代謝能力有巨大的差異。同樣，DNA修復能力也存在顯著的個體差異。人類基因組計劃研究成果表明，每個人的基因都是一樣的，但在序列上有極小的變異如單核苷酸多態(SNPs)。正是這些基因的SNP多態性導致了基因產物的功能差異，從而決定個體對引起白血病發病的特定致癌物的代謝能力及DNA損傷后修復能力的不同。因此，代謝類基因、DNA修復基因等的多態性是決定人群對白血病易感性的遺傳因素。

生物代謝酶參與許多常見化學致癌物的代謝、活化或解毒過程。環境致癌物多為無活性的原致癌物，進入人體后大部分經以CYP450酶系為代表的I相酶代謝活化為親電子的終致癌物，再由II相代謝酶代謝失活，轉化為親水性物質排出體外，致癌物能否引起靶細胞癌變很大程度上取決于這兩類酶的活性及其平衡關系。生物代謝酶基因在人群中呈現多態性分布，相關基因缺失或變異有可能導致機體不能產生有活性的酶蛋白或使酶的表達量減少，機體的解毒能力降低，致癌物在體內蓄積，從而使所累個體患癌的危險性增大。大量分子流行病學研究表明，人群中腫瘤遺傳易感性與代謝酶遺傳多態性相關。

CYP1A1是I相代謝酶CYP450家族的一員，其基因定位于人類染色體15q22-q24，含有5934個堿基對，編碼的蛋白質含有512個氨基酸殘基，其長度為6311bp，包括7個外顯子和6個內含子，其中第一個外顯子不編碼蛋白質。CYP1A1主要編碼產物是芳烴羥化酶(aryl?hydrocarbon?hydroxylase，AHH)。環境中大多數致癌物都是CYP1A1的底物，主要代謝多環芳烴類致癌劑。其MspI多態(rs4646903)是由CYP1A13′端非編碼區的6235位點產生T→C突變，形成MspI內切酶識別序列，有野生型(TT)、雜合型(TC)、純合突變型(CC)3種基因型。研究發現，CYP1A1突變基因型可提高酶的誘導活性，加速致癌物的活化。因此，攜帶CYP1A1MspI突變基因型CC的個體對環境致癌物更敏感，從而增加了個體患白血病的危險。

NQO1，即NAD(P)H：醌氧化還原酶，又稱D-硫辛酰胺脫氫酶，是體內一種重要的II相反應酶，主要存在胞質內，但在內質網、線粒體和高爾基體中也存在。NQO1基因定位于人類染色體16p22，基因全長20kb，含6個外顯子。NQO1以NAD(P)H為受體，可將NADH或NADPH的電子傳遞給醌類及其衍生物，發生雙電子還原反應，生成低毒的氫醌類化合物。其催化特性在于無單電子還原產物半醌及自由基等氧化產物形成，避免了對細胞的損傷，降低具有致癌性和致畸性的醌類化合物的危害。NQO1與其他I、II相代謝酶一起構成了體內對外源致癌物質的代謝網絡，在機體的解毒代謝中發揮著重要作用。

NQO1基因cDNA?609位點上(rs1800566)存在C→T單核苷酸多態性，通過孟德爾方式遺傳，符合Hardy-Weinberg平衡。此位點多態性導致NQO1基因編碼的187位氨基酸由脯氨酸變成了絲氨酸，雖不影響其mRNA的合成，但可能改變了酶的二級結構，使酶的活性降低，增加了氧自由基的生成。純合野生基因型CC具有完全的NQO1酶活性，雜合基因型CT的酶活性較純合野生型降低3倍，純合突變基因型TT的酶活性則完全喪失。因此，NQO1缺陷可降低細胞解毒致癌物的能力，從而影響細胞代謝途徑，增加致癌物負荷并能導致某些易感個體惡性變。研究表明，成人純合突變基因型TT會增加苯中毒的危險性，并可增加患白血病的危險性，