[發明專利]一種用于檢測I型糖尿病易感的基因組合、引物、探針和用途

無效

• 申請號: 200910069882.6
• 申請日: 2009-07-24
• 公開（公告）號: CN102002520A
• 公開（公告）日: 2011-04-06
• 發明（設計）人: 楊亞非
• 申請（專利權）人: 南京微宇基因工程有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 天津才智專利商標代理有限公司 12108
• 代理人: 王曉紅

技術領域

本發明涉及一種基因組合、引物、探針和用途，尤其是用于檢測I型糖尿病易感性的基因組合、引物、探針和用途。?

背景技術

糖尿病是常見病、多發病，其患病率正隨人民生活水平的提高、人口老化和生活方式的改變迅速增加。據世界衛生組織(WHO)估計，全球目前有超過1.5億糖尿病患者，到2025年這一數字將增加一倍。我國現有糖尿病患者3千萬，居世界第2位。糖尿病已成為發達國家中繼心血管病和腫瘤之后的第三大非傳染性疾病，對社會和經濟帶來沉重的負擔，是嚴重威脅人類健康的世界性公共衛生問題。根據WHO和國際糖尿病聯盟(IDF)專家組的建議，糖尿病可分為1型、2型、其他特殊類型及妊娠糖尿病四種。研究表明，1型糖尿病占糖尿病總發病人數的7％~10％，且近年來該病的發病率呈逐年上升趨勢。?

糖尿病的病因和發病機制較為復雜，至今尚未完全明了。目前認為1型糖尿病(type?1?diabetes，T1DM)是一種在遺傳與環境相互作用下，以T細胞介導的特異性胰島β細胞自身免疫性破壞為主要發病機制的一種疾病。1型糖尿病具有多基因遺傳背景，易感性十分復雜，疾病的發生是多種基因相互作用、相互影響的結果。近年來，隨著對1型糖尿病相關基因的研究日趨深入，證實了多種基因在I型糖尿病的發生發展中的作用，為I型糖尿病的早期診斷和治療提供了理論依據。?

蛋白酪氨酸磷酸酶22(protein?tyrosine?phosphatase?N22，PTPN22)基因位于人染色體1p13，編碼淋巴特異性酪氨酸磷酸酶(Lyp)。PTPN22基?因620密碼子編碼精氨酸(Arg)，1858C變異為1858T(rs2476601)后，620密碼子編碼色氨酸(Trp)，攜帶Arg620的Lyp能通過SH3結構域與CSK激酶(C端Src酪氨酸激酶)構成復合物，抑制T細胞激活，而攜帶Trp620的Lyp不能形成復合物，從而1858T雜合子個體可能減少了Lyp-Csk復合物的形成，因此在病毒感染或其他免疫壓力下，高反應性的T細胞更易產生針對自身抗原的破壞性免疫反應，增加1型糖尿病的患病風險。?

細胞毒性T淋巴細胞相關抗原4(cytotoxic?T?lymphocyte-associatedantigen?4，CTLA-4)基因位于染色體2q33，編碼T細胞表面的一種膜蛋白。研究表明，只有激活的T細胞才表達CTLA-4分子，并與抗原遞呈細胞膜上的B7分子結合，傳遞負性調節信號，終止T細胞活化和抑制免疫反應的進行，對T細胞增生起負性調節作用。研究表明CTLA-4基因外顯子1第17密碼子49位點A/G多態性(rs231775)，導致CTLA-4信號肽區域內的蘇氨酸變為丙氨酸，與機體免疫應答的過度激活相關，是1型糖尿病的獨立危險因素之一。?

維生素D受體(vitamin-D?receptor，VDR)基因定位于人染色體12q12-q14，現發現有14個外顯子，總長度約為75kb。VDR與1，25-(OH)₂-VitD3形成復合物之后，常與其它的核受體形成異二聚體，抑制白細胞介素、干擾素-γ、腫瘤壞死因子-α等的產生以及T細胞的增殖。VDR基因存在FokI?A/G多態性(rs2228570)，啟動編碼產生一3個氨基酸長度的VDR蛋白，可能與1型糖尿病的發病有關。?

1型糖尿病是遺傳易感個體在環境因素影響下發生的慢性自身免疫紊亂。PTPN22基因、CTLA-4基因和VDR基因的多態性與機體的免疫功能紊亂有關，與1型糖尿病的易感、發生密切相關。由于1型糖尿病的基因背景非常復雜，不同的易感基因之間可能存在相互作用。某一易感基因對1型糖尿病的影響可由于其他基因的作用而改變，如果同時對多種易感基因進行分析，則有助?于闡明各種易感基因之間的相互作用機制及其對1型糖尿病的影響。?

現有技術檢測I型糖尿病易感人群，采用雜交芯片法或玻璃板芯片法，以及利用taqman探針，該方法準確率低、假陰性和假陽性率較高，且不能批量檢測；另一種直接測序法，雖準確率高，但其成本高、同樣不能實現批量檢測，因此現有方法均無法滿足大規模基因篩選的要求。?

發明內容

本發明所要解決的技術問題是，通過檢測一組與I型糖尿病易感性相關的基因及位點，利用特異性引物和探針，通過單核苷酸延伸技術結合微陣列芯片技術，綜合檢測和分析受檢人群是否攜帶“I型糖尿病易感基因”，將I型糖尿病易感人群從人群中篩選出來，改變不良的生活習慣，達到預防的目的。?