[發明專利]水環境中致病菌超敏感檢測技術

無效

• 申請號: 200910069391.1
• 申請日: 2009-06-23
• 公開（公告）號: CN101930002A
• 公開（公告）日: 2010-12-29
• 發明（設計）人: 諶志強;李君文;王新為;金敏;王景峰;邱志剛;陳照立
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院衛生學環境醫學研究所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/532;G01N27/414
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.水環境中致病菌超敏感檢測技術及應用，其特征是由如下步驟組成：

(1)制備5種細菌的多克隆抗體

分別利用大白兔和昆明小鼠制備5種致病菌的多克隆抗體，ELISA法測定效價在1∶10000～1∶200000，采用飽和硫酸銨法和金黃色葡萄球菌蛋白A(SPA)親和層析法純化制備的多克隆血清；

(2)免疫納米磁顆粒的制備

采用化學共沉淀法制備粒徑為10nm～100nm的納米磁顆粒，取純化好的濃度為0.2mg/mL～1.0mg/mL某種致病菌兔多克隆抗體連接到1mL納米磁顆粒上制成免疫納米磁顆粒。

(3)免疫膠體金的制備

膠體金采用檸檬酸鈉改良法制備，制備粒徑為10nm～50nm的膠體金，將濃度為0.2mg/mL～1.0mg/mL的羊抗兔IgG連接至膠體金上即為免疫膠體金。

(4)壓電傳感器的檢測

①石英晶振用piranha液進行洗滌，取濃度為0.2mg/mL～2.0mg/mL的SPA溶液10μl固定于壓電傳感器的石英晶振10～90min，檢測頻率變化。確定SPA的最佳固定濃度和時間后，取濃度為0.1mg/mL～1.8mg/mL的致病菌鼠多克隆抗體溶液10μl固定于壓電傳感器的石英晶振10～90min，檢測頻率變化。確定致病菌鼠多克隆抗體的最佳固定濃度和時間。

②按最佳固定濃度和最佳固定時間分別將SPA和抗體固定于壓電傳感器的石英晶振上，將不同濃度的致病菌液滴加于石英晶振上，檢測頻率變化；取10μl免疫磁顆粒滴加于石英晶振上，檢測頻率變化；取10μl免疫膠體金滴加于石英晶振上，檢測頻率變化。最后得出5致病菌的檢測限。

2.根據權利要求1所述的水環境中致病菌超敏感檢測技術及應用，其特征是所述的5種致病菌的多克隆抗體，ELISA法測定效價在1∶100000～1∶120000。

3.根據權利要求1所述的水環境中致病菌超敏感檢測技術及應用，其特征是所述的納米磁顆粒粒徑約為50nm，連接的抗體濃度要求為0.5mg/mL。

4.根據權利要求1所述的水環境中致病菌超敏感檢測技術及應用，其特征是所述的膠體金改良法為微波爐方法，制備的膠體金粒徑約為20nm，連接的羊抗兔IgG濃度要求為0.5mg/mL。

5.根據權利要求1所述的水環境中致病菌超敏感檢測技術及應用，其特征是所述的SPA的最佳固定濃度和最佳固定時間分別為1.2mg/mL和40min；抗體的最佳固定濃度和最佳固定時間分別為1.0mg/mL和60min。5種致病菌的檢測限為10¹CFU/mL。