[發(fā)明專利]殺滅線蟲菌制劑及其制備方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910069198.8
• 申請(qǐng)日: 2009-06-09
• 公開（公告）號(hào): CN101564046A
• 公開（公告）日: 2009-10-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張清敏;齊建超;薛洪濤;崔合香;崔小會(huì)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南開大學(xué)
• 主分類號(hào): A01N63/02
• 分類號(hào): A01N63/02;A01P5/00;A01P21/00;C12N1/20;C12R1/11;C12R1/39;C12R1/01
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及環(huán)境生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種殺滅土壤線蟲菌制劑及其制備方法。

背景技術(shù)

土壤線蟲顯著增多，植物病害的種類和范圍不斷增加，這都是土壤生態(tài)系統(tǒng)遭到破壞的明證。其中土壤線蟲是直接影響農(nóng)作物產(chǎn)量的土壤害蟲，尤其是種植花生、紅薯的土壤，線蟲可以把整塊整塊土地的花生、紅薯吃光或破壞，幾乎絕收。以前只是尋求化學(xué)殺蟲劑，如涕滅威(Aldicarb)，第一年有效，第二年則幾乎無效，而且它所造成的土壤污染幾十年都消除不掉。所以，研究開發(fā)微生物制劑殺滅線蟲勢(shì)在必行。國內(nèi)外已有一些研究，但是，還未見高密度、高活性，可大面積使用的菌制劑的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：提供一種高密度、高活性的殺滅土壤線蟲菌制劑及其制備方法。

本發(fā)明解決該技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：

本發(fā)明殺滅線蟲的菌制劑由巨大芽孢桿菌(Bacillusmegaterium)、熒光假單胞菌(Pseudomonas?fluorescens)和細(xì)黃鏈霉菌(Staestomyces?microflavus)優(yōu)化組合組成的復(fù)合菌群，其中各菌菌落數(shù)比例是1∶0.5～1∶1～1.5，吸附載體為腐殖酸。

本發(fā)明的殺滅線蟲的菌制劑的制備方法，包括下述步驟：

1)將保存的巨大芽孢桿菌(Bacillusmegaterium)、熒光假單胞菌(Pseudomonasfluorescens)和細(xì)黃鏈霉菌(Staestomyces?microflavus)斜面菌種活化，分別搖瓶培養(yǎng)；基本培養(yǎng)基：可溶性淀粉培養(yǎng)基培養(yǎng)，具體配方如下：可溶性淀粉20g，KNO₃?1g，NaC1?0.5g，K₂HPO₄?0.5g，MgSO₄.7H₂O?0.5g，F(xiàn)eSO₄?0.01g，蒸鎦水1000mL，pH7.0～7.2，0.1Mpa，121℃高壓滅菌20～30min；28～30℃培養(yǎng)12～24h；

2)將各菌群混合，二級(jí)液體擴(kuò)大培養(yǎng)，總體積5～20L，以玉米面代替可溶性淀粉培養(yǎng)基中的可溶性淀粉，并添加重量百分比0.1％的腐殖酸，其他成分和比例與可溶性培養(yǎng)基相同，接種量體積百分比為5％～10％，28～30℃培養(yǎng)12～24h；菌群密度為5×10⁸/mL-8×10⁸/mL；

3)再三級(jí)液體擴(kuò)大培養(yǎng)，總體積10倍于2)，擴(kuò)大培養(yǎng)基同2)，接種量體積百分比為5％～10％，28～30℃培養(yǎng)12～24h；菌群密度為1×10⁹/mL-9×10⁹/mL；

4)以腐殖酸為載體將混合菌群均勻吸附、固定化于腐殖酸上，腐殖酸與的步驟3)的擴(kuò)大培養(yǎng)液重量比為3~5，菌群密度為2×10⁸/mL-3×10⁹/mL。

巨大芽孢桿菌(Bacillus?megaterium)、熒光假單胞菌(Pseudomonas?fluorescens)和細(xì)黃鏈霉菌(Streptomyces?microflavus)，都是能產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶和脫氫酶的菌，能夠破壞線蟲的腸壁，從而殺滅線蟲；而且這三種菌都有可以促進(jìn)植物根生長、改善根圍生態(tài)環(huán)境的作用。將三種菌活化經(jīng)三級(jí)液體擴(kuò)大培養(yǎng)并吸附、固定化于腐殖酸上制備成菌制劑。三株菌種均購于中國科學(xué)院微生物研究所菌種保藏中心。

殺滅土壤線蟲菌制劑是上述三種菌群優(yōu)化組合的復(fù)合微生物，這三種菌都是農(nóng)業(yè)部允許使用的安全、無害的菌。

本發(fā)明的有益效果

1)復(fù)合菌固定化于腐殖酸上，使每克復(fù)合菌制劑的有效菌菌落數(shù)(CFU)可高達(dá)10個(gè)億以上(2~3×10⁹/g)，幾乎達(dá)到了最大可能數(shù)，至今還未見如此高含菌量菌制劑的報(bào)道。腐殖酸不僅能為所培養(yǎng)菌提供一些營養(yǎng)成分，還由于其網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，具有較大的比表面積，所以能在單位體積內(nèi)附著吸附固定化較多的菌體。所以，有效菌一旦施入土壤可以很快形成優(yōu)勢(shì)菌群，發(fā)揮殺滅線蟲的作用，殺滅率94-98％。

2)土壤線蟲的腸壁細(xì)胞含有較多的幾丁質(zhì)，而巨大芽孢桿菌等菌能分泌較多的幾丁質(zhì)酶。所以，土壤線蟲一旦遇到巨大芽孢桿菌等菌體，由于其腸壁遭到幾丁質(zhì)酶的破壞，最后破腸而死。巨大芽孢桿菌還具有把土壤固定化的磷轉(zhuǎn)化為可溶性磷，可溶性磷是植物可利用的磷。

細(xì)黃鏈霉菌，能產(chǎn)生抗生素抗病、驅(qū)蟲，分泌刺激素，促進(jìn)植物生長，轉(zhuǎn)化礦物質(zhì)。