[發(fā)明專利]一種酶法去除普魯蘭多糖提取獲得β－聚蘋果酸的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910068951.1
• 申請日: 2009-05-21
• 公開（公告）號: CN101560528A
• 公開（公告）日: 2009-10-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 喬長晟;王鳳榮;蔣磊;徐勇虎;賈士儒
• 申請（專利權(quán)）人: 天津科技大學(xué)
• 主分類號: C12P7/62
• 分類號: C12P7/62;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.利用酶法去除普魯蘭糖獲得β-聚蘋果酸的制備方法，包括以下步驟：

第一步培養(yǎng)基的配制

(1)菌種活化培養(yǎng)基：土豆葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)：土豆200g/L，葡萄糖20g/L，瓊脂20g/L，pH?4.0～4.5，121℃高壓蒸汽滅菌15min；

(2)種子培養(yǎng)基：葡萄糖8％，丁二酸銨0.3％，丁二酸0.2％，K₂CO₃0.04％，KH₂PO₄0.01％，MgSO₄·7H₂O?0.01％，ZnSO₄·7H₂O5×10^-4％，玉米浸出液0.05％，CaCO₃?2％(單獨滅菌)，pH?4.5，121℃高壓蒸汽滅菌15min；

(3)發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖12％，丁二酸銨0.3％，丁二酸0.2％，K₂CO₃0.04％，KH₂PO₄0.01％，MgSO₄·7H₂O?0.01％，ZnSO₄·7H₂O?5×10^-4％，玉米浸出液0.05％，CaCO₃3％(單獨滅菌)，pH?4.5，121℃高壓蒸汽滅菌15min；

第二步菌種活化

將斜面菌種——出芽短梗霉(Aureobasidium?Pullulan)轉(zhuǎn)接PDA培養(yǎng)基，25℃活化培養(yǎng)3d～5d；

第三步種子培養(yǎng)

將第二步活化的斜面菌種接種于裝有100mL第一步制得的種子培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，在24～30℃，120～180r/m下培養(yǎng)48～90h；

第四步發(fā)酵培養(yǎng)

將第三步制得的種子培養(yǎng)液以8％～10％(v/v)接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在24℃～30℃，200r/m下培養(yǎng)7d～12d；

第五步分離提取

(1)普魯蘭多糖的降解：在第四步發(fā)酵結(jié)束后取發(fā)酵液，離心或過濾除去菌體，發(fā)酵過濾液(上清液)調(diào)節(jié)pH?5～7，添加普魯蘭酶6～11plu/mL，在30℃～60℃下，緩慢攪拌，反應(yīng)60min～90min；

(2)β-聚蘋果酸的提取：將第五步(1)中的發(fā)酵液冷卻至室溫，緩慢攪拌，加入無水甲醇使酶解后的發(fā)酵過濾液中甲醇終濃度為40％～60％(v/v)，將該混合液于室溫下緩慢攪拌后放置過夜，獲得的沉淀即為β-聚蘋果酸粗品，將β-聚蘋果酸粗品按1∶10(m∶v)溶于蒸餾水中，經(jīng)5000r/m離心，除去小分子不溶物，真空濃縮后冷凍干燥得β-聚蘋果酸。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的降解普魯蘭多糖獲得β-聚蘋果酸方法，其特征在于，在β-聚蘋果酸的提取過程中，發(fā)酵過濾液添加普魯蘭酶降解發(fā)酵過程中的副產(chǎn)物普魯蘭多糖，提取獲得β-聚蘋果酸。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的降解普魯蘭多糖后提取獲得β-聚蘋果酸的方法，其特征在于，發(fā)酵過濾液調(diào)pH?5～pH?7后添加普魯蘭酶。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的降解普魯蘭多糖后提取獲得β-聚蘋果酸的方法，具特征在于，發(fā)酵過濾液添加6～11plu/mL的普魯蘭酶，提取獲得β-聚蘋果酸。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的降解普魯蘭多糖后提取獲得β-聚蘋果酸的方法，其特征在于，發(fā)酵過濾液在30℃～50℃下，添加普魯蘭酶，提取獲得β-聚蘋果酸。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的降解普魯蘭多糖后提取β-聚蘋果酸的方法，其特征在于，發(fā)酵過濾液添加普魯蘭酶，緩慢攪拌，反應(yīng)30min～90min后，提取獲得β-聚蘋果酸。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的降解普魯蘭糖后提取獲得β-聚蘋果酸的方法，其特征在于發(fā)酵過濾液降解普魯蘭糖后添加甲醇使甲醇終濃度為40％～60％(v/v)以獲得β-聚蘋果酸。