[發(fā)明專利]一種多靶點(diǎn)抗癌腺病毒的構(gòu)建和用途

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910067756.7
• 申請(qǐng)日: 2009-01-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101565692A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-10-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張慶瑜;康春生;浦佩玉;張春智;付彥超;張靖;王濤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N7/01
• 分類號(hào): C12N7/01;C12N15/861;A61K48/00;A61P35/00;C12R1/93
• 代理公司: 天津佳盟知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 侯 力

1、一種基于反義RNA技術(shù)的、以腫瘤細(xì)胞Akt1、PI3K?p85亞基和COX-2為藥靶的抗癌重組腺病毒，其特征是在病毒載體基因組多克隆位點(diǎn)下游分別插入針對(duì)人源性和小鼠源性U6啟動(dòng)子，在U6啟動(dòng)子下游連接反義的Akt1、PI3K?p85亞基和COX-2插入序列的表達(dá)模扳構(gòu)成。

2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組腺病毒，其特征在于所述的病毒載體是腺病毒載體。

3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的重組腺病毒，其特征在于所述的腺病毒載體是pGSadeno腺病毒載體。

4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組腺病毒，其特征在于所述的反義的Akt1、PI3K?p85亞基和COX-2RNA序列采用：序列表中的SEQ?ID?NO.1/SEQ?ID?NO.2，SEQ?ID?NO.1為正義鏈，SEQ?ID?NO.2為反義鏈；SEQ?ID?NO.3/SEQ?ID?NO.4，SEQ?ID?NO.3為正義鏈，SEQID?NO.4為反義鏈；SEQ?ID?NO.5/SEQ?ID?NO.6，SEQ?ID?NO.5為正義鏈，SEQ?ID?NO.6為反義鏈。

5、一種權(quán)利要求1所述的重組腺病毒的構(gòu)建方法，其特征在于包括：

第一、將序列表中的SEQ?ID?NO.1/SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.3/SEQ?ID?NO.4、SEQID?NO.5/SEQ?ID?NO.6退火形成雙鏈結(jié)構(gòu)，通過(guò)亞克隆連接于質(zhì)粒載體用以構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒，獲得以腫瘤細(xì)胞Akt1、PI3K?p85亞基和COX-2為藥靶的抗癌重組質(zhì)粒。

第二、將上步得到的真核表達(dá)質(zhì)粒通過(guò)亞克隆連接于穿梭載體：LR體外同源重組至腺病毒載體，線性化腺病毒DNA后轉(zhuǎn)染293包裝細(xì)胞，獲得以腫瘤細(xì)胞Akt1、PI3K?p85亞基和COX-2為藥靶的抗癌重組腺病毒。

6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述的腺病毒載體是pGSadeno腺病毒載體。

7、權(quán)利要求1所述的重組腺病毒在制備抑制腫瘤生長(zhǎng)藥物中的應(yīng)用。