[發(fā)明專利]抗人Her2單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞系、單克隆抗體、試劑盒及其用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910067698.8
• 申請(qǐng)日: 2009-01-15
• 公開（公告）號(hào): CN101463344A
• 公開（公告）日: 2009-06-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉紅芹;石琳;屈浩;田晨;王冬梅;黃麗華;張麗艷;馮春玲;張毅;何大水;朱衛(wèi)彬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 協(xié)和干細(xì)胞基因工程有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/20
• 分類號(hào): C12N5/20;C07K16/30;G01N33/577
• 代理公司: 天津才智專利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 王曉紅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種可以特異性識(shí)別人Her2分子，用于腫瘤的診斷、預(yù)后 判斷，或指導(dǎo)治療腫瘤的抗人Her2單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞系、單克隆抗體、 試劑盒及其用途。

背景技術(shù)

乳腺癌是危害婦女健康的主要惡性腫瘤，僅次于宮頸癌，在女性惡性 腫瘤發(fā)病率中居第2位。全世界每年約有120萬(wàn)婦女發(fā)現(xiàn)乳腺癌，有50萬(wàn) 婦女死于乳腺癌。北美、北歐是乳腺癌的高發(fā)地區(qū)，其發(fā)病率約為亞、非、 拉美地區(qū)的4倍。我國(guó)是乳腺癌的低發(fā)地區(qū)，但其發(fā)病率正逐年上升，尤 其滬、京、津等大城市及沿海地區(qū)。城市和農(nóng)村女性乳腺癌有差別，城市 愈大，乳腺癌發(fā)病率愈高，城市各年齡組乳腺癌死亡率均高于農(nóng)村。乳腺 癌在女性的發(fā)病率隨著年齡的增長(zhǎng)而上升，在月經(jīng)初潮前罕見，20歲前亦 少見，但20歲以后發(fā)病率迅速上升。45～50歲較高，但呈相對(duì)的平坦，絕 經(jīng)后發(fā)病率繼續(xù)上升，到70歲左右達(dá)最高峰；死亡率也隨年齡而上升，在 25歲以后死亡率逐步上升，直到老年時(shí)始終保持上升趨勢(shì)。

人表皮生長(zhǎng)因子受體-2(human?epidermal?growth?factor?receptor-2， Her2)是表皮生長(zhǎng)因子受體家族(EGFR)的第二類成員，目前尚未發(fā)現(xiàn)其自身 的特異性配體。Her2/neu基因，又名c-erbB2，其編碼的產(chǎn)物為185,000 的糖蛋白p185，具有酪氨酸激酶活性，在結(jié)構(gòu)上與表皮生長(zhǎng)因子受體EGFR 具有同源性。p185與許多生長(zhǎng)因子受體都參與絲裂原信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。Her2/neu 基因的過表達(dá)在腫瘤形成中起重要作用。人類多種腫瘤包括乳腺癌、卵巢 癌、肺癌、胰腺癌等均有Her2/neu的過表達(dá)，其在乳腺癌中的過表達(dá)達(dá) 30％。多項(xiàng)研究表明抗p185蛋白的單抗能在體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)中抑制 Her2/neu過表達(dá)的腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。

Her2/neu是跨膜受體，可用多種實(shí)驗(yàn)方法直接作用于其胞外域，因而 是一種理想的治療靶向。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均證明，抗Her2/neu單克隆抗體能抑 制過表達(dá)Her2/neu的乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)。以Her2為靶抗原的抗體介導(dǎo)已成 為有效的生物治療手段。美國(guó)FDA于1998年批準(zhǔn)一種Her2人源化改良型 抗體群司珠單抗(trastuzumab；又稱赫賽汀，HERceptin)上市治療轉(zhuǎn)移性 乳腺癌，將乳腺癌的療效提高了約20％。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：提供一種抗人Her2單克隆抗體雜交瘤 細(xì)胞系、單克隆抗體，其可以識(shí)別人類Her2抗原，可以為腫瘤特別是乳腺 癌的診斷及治療提供有力工具。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種抗人Her2單 克隆抗體雜交瘤細(xì)胞系，所述細(xì)胞系的保藏號(hào)為CGMCC?NO.2748。

一種抗人HER2單克隆抗體，由保藏號(hào)為CGMCC?NO.2748雜交瘤分泌。

所述的抗體是鼠源性單克隆抗體，屬于IgM/κ亞型。

所述的抗人Her2單克隆抗體在制備腫瘤診斷試劑或指導(dǎo)治療腫瘤的 檢測(cè)中的應(yīng)用。

一種免疫檢測(cè)試劑盒，含有至少一種上述的單克隆抗體。

所述的免疫檢測(cè)試劑盒在診斷惡性腫瘤；或評(píng)價(jià)惡性腫瘤的發(fā)展和預(yù) 后；或指導(dǎo)惡性腫瘤的治療中的用途。

本發(fā)明的有益效果：

1、所制備的抗體可以特應(yīng)性識(shí)別人類Her2抗原，其識(shí)別表位滿足用 于免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)人類組織中的Her2抗原的要求。

2、所組裝的試劑盒方便有效、靈敏度高，可以用于臨床標(biāo)本檢測(cè)，為 診斷和預(yù)后判斷提供依據(jù)。

附圖說(shuō)明

圖1是Her2胞外區(qū)編碼基因PCR產(chǎn)物凝膠電泳圖。1為DL2000標(biāo)準(zhǔn)分 子量marker，2為擴(kuò)增的Her2基因。

圖2是純化的Her2蛋白的SDS-PAGE電泳圖。1為未經(jīng)誘導(dǎo)的全細(xì)菌裂 解液，2為IPTG誘導(dǎo)的全細(xì)菌裂解液，3為誘導(dǎo)的細(xì)菌裂解上清，4為誘 導(dǎo)的細(xì)菌裂解沉淀，5為標(biāo)準(zhǔn)分子量蛋白marker，6為純化后的Her2蛋白

圖3是本發(fā)明的試劑盒染色的SK-Br3細(xì)胞(標(biāo)本為于載玻片上培養(yǎng)的 SK-Br3細(xì)胞)。

圖4是本發(fā)明的試劑盒染色的293細(xì)胞(標(biāo)本為于載玻片上培養(yǎng)的293 細(xì)胞)。

圖5是本發(fā)明試劑盒染色的SK-Br3細(xì)胞，左側(cè)為HIHer2抗體染色， 右側(cè)為PBS陰性對(duì)照(標(biāo)本為于載玻片上培養(yǎng)的SK-Br3細(xì)胞)。