[發明專利]一種乳酸乳球菌誘變菌株及其培育方法

有效

• 申請號: 200910067452.0
• 申請日: 2009-08-28
• 公開（公告）號: CN102093962A
• 公開（公告）日: 2011-06-15
• 發明（設計）人: 滕利榮;任曉冬;姜麗艷;孟慶繁;逯家輝;馬富強;王貞佐;程瑛琨;蘭鵬飛;李雪
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N15/01;C12R1/01
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100
• 代理人: 陳宏偉

1.一種乳酸乳球菌誘變菌株，其保藏號為：CGMCC?NO.3050。

2.獲得權利要求1所述乳酸乳球菌菌株的方法，包括以下步驟完成：

1)將Lactococcus?lactis?subsp.lactis?ATCC11454凍干粉末接入液體小試管培養基中進行活化后，轉接至液體搖瓶培養基中，30-38℃恒溫箱中培養8-24h，連續傳代5次后，接種新的種子液，接種量為5％(v/v)，裝液量為100mL(搖瓶容量250mL)，將培養8h的菌液，8000r/min離心10min，菌體用無菌水清洗兩遍，加一定體積水，在有玻璃珠的三角瓶中30℃振蕩1h，用血球計數板進行計數后，8000r/min離心10min，取菌體沉淀；

2)在菌體沉淀中加入1％-3％(v/v)的0.1mol/L的硫酸二乙酯磷酸鹽緩沖液(調節使菌體濃度為1×10⁸個/mL)，pH?7.0，放入150r/min搖床振搖15-40min；

3)采用25％硫代硫酸鈉進行終止誘變反應，將誘變菌液逐級稀釋至1×10⁶倍，涂布乳鏈菌肽抗性梯度平板，30-38℃恒溫箱中培養8-24h，對乳鏈菌肽高產菌株進行初篩，采用雙層瓊脂擴散法進行復篩；

4)將篩選獲得的菌株在搖瓶中復蘇，30℃，150r/min恒溫搖床中培養8-24h，連續傳代10次，即得。