[發明專利]牛蛙皮膚活性肽及其基因和在制藥中的應用

無效

• 申請號: 200910067288.3
• 申請日: 2009-07-15
• 公開（公告）號: CN101724632A
• 公開（公告）日: 2010-06-09
• 發明（設計）人: 韓文瑜;韓俊友;趙瑞利;雷連成;馮新;孫長江
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C07K14/46;A61K38/17;A61P31/04;A61P17/18
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100
• 代理人: 陳宏偉

技術領域

本發明涉及一種牛蛙皮膚活性肽及其基因和在制藥中的應用，屬于生物醫學領域。?

背景技術

自從青霉素發現以來，抗生素一直是人類治療病原微生物感染疾病的有力武器，但是由于人類對″抗生素″的持續使用和濫用，導致很多細菌對現有的抗生素都產生了耐藥性，所以尋找全新的機制殺傷病原微生物，且不易形成耐藥性的新型抗生素已經成為目前研究的熱點之一。兩棲類動物皮膚多肽類不僅具有高效、廣譜且不易產生耐藥性等特點，在耐抗生素病原菌株不斷出現的今天，已成為人們應對日趨嚴重的耐藥性細菌的新型生物制劑的主要生物資源。相關研究結果顯示，兩棲類皮膚多肽目錄呈現出超乎想象的分子和功能多樣性。蛙科(Ranidae)是分布最廣泛的兩棲動物，幾乎遍及各大洲，占據著不同的生態地位，為適應特定環境，它們皮膚的活性成分在種類和數量等方面，都是極其驚人的。?

在中國，很多兩棲類動物被作為傳統中藥和民族藥物而廣泛應用，如中華蟾蜍(Bufo?gargarizans)等。這些兩棲類動物的皮膚和內臟具有廣泛的藥理活性和臨床療效。已報道藥理活性有廣譜抗微生物作用、抗腫瘤、鎮痛、局部麻醉、免疫調節、心血管系統作用等。據國內外文獻報道，已從各種生物來源分離得到不同的活性多肽，而且有些已進入臨床治療。例如從爪蟾(Xenopus?laevis)皮膚分泌液獲得的抗菌肽Magainin具光譜抗微生物作用，同時具有抗腫瘤活性，在美國已獲準作為廣譜抗菌藥物，其基因工程產品已進入三期臨床。?

目前我國科學家研究發現滇蛙皮膚具有極強的氧化自由基清除能力，并從滇蛙皮膚分泌液中發現了11個家族的抗氧化多肽。這些抗氧化多肽是由15～30個氨基酸組成的小肽。這些蛙類抗氧化多肽快速、強大的自由基清除能力可以最大限度地保護蛙類皮膚，使其盡可能少地受到日照、紫外線等誘導的自由基損傷，是皮膚保護、皮膚抗氧化領域的重大發現，對生物醫學、抗氧化保護以及化妝品研發具有重要意義。牛蛙，原產于北美洲，1959年從古巴、日本引進我國內陸。目前我國主要靠養殖生產，全國各地均產，主要集中于湖北、湖南、江西、新疆、四川等地。?

發明人將本發明的牛蛙皮膚活性肽氨基酸結構經蛋白質數據庫進行比較，未發現有任何相同多肽。發明人將本發明的牛蛙皮膚活性肽編碼基因經數據庫進行比較，與其它已發現的活性肽基因的同源性比較低。?

發明內容：

本發明的目的在于提供一種牛蛙皮膚活性肽及其基因，為新的活性肽，具有廣譜抗細菌功效。?

本發明還公開了牛蛙皮膚活性肽及其基因在作為制備病原微生物感染疾病的治療藥物的應用。?

本發明進一步公開了牛蛙皮膚活性肽及其基因在在制備抗氧化保護藥物中的應用。

本發明的牛蛙活性肽基因，其cDNA由369個核苷酸組成，其自5′端至3′端序列為：?

atgttcaccatgaagaaatcgctgttactcctttttttccttgggaccatcaacttatct??60?

ttttgtgaaaaggagagaagagaaagagggaaacggatgatgagggtgatgaggaggaag?120?

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本發明的牛蛙活性肽，其分子量為3144.8道爾頓，等電點為10.16；編碼牛蛙皮膚活性肽的為97-171位核苷酸，其氨基酸序列為：?

Met?Met?Arg?Val?Met?Arg?Arg?Lys?Thr?Lys?Val?IIe?Trp?Glu?Arg?Arg?Asp?Phe?IIe?Gly?LeuTyr?Ser?IIe?Asp。?

本發明牛蛙皮膚活性肽的制備過程，包括以下步驟：?

1)牛蛙皮膚活性肽基因的克隆：?