[發明專利]壞死梭桿菌專用高效培養基及其制備方法

無效

• 申請號: 200910066772.4
• 申請日: 2009-04-08
• 公開（公告）號: CN101519642A
• 公開（公告）日: 2009-09-02
• 發明（設計）人: 陳立志;王克堅;楊福合;劉曉穎;程世鵬
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院特產研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/145
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司
• 代理人: 王 薇

技術領域：

本發明涉及一種壞死梭桿菌專用高效培養基及其制備方法。

背景技術：

壞死梭桿菌是一類在低氧分壓條件下才能生長的專性厭氧菌，該菌缺乏完整的代謝酶系統，能量代謝以無氧發酵方式進行，而無氧發酵獲得能量比有氧氧化產生能量低得多，現有的壞死梭桿菌培養基一般采用牛肉湯、皰肉培養基和肝腦浸汁混合而成，由于營養低氧化并且還原電勢高，細菌生長不旺盛或不生長，不能達到疫苗生產或研究需要。

發明內容：

本發明的目的在于提供一種壞死梭桿菌專用高效培養基及其制備方法，其培養基在培養壞死梭桿菌過程中，細菌生長旺盛，細菌產量大，價格低廉，適于疫苗生產或白細胞毒素提取。

本發明的技術方案是這樣實現的：壞死梭桿菌專用高效培養基及其制備方法，其特征在于：培養基由以下12種必需成分組成，牛肉、豬胰臟、胃蛋白酶、肝臟、氯仿、Na₂HPO₄H·H₂O、NaCl、氯化血紅素、維生素K、半胱氨酸鹽酸鹽、葡萄糖和水；

具體的制備方法由以下步驟完成：

1、收集并處理培養基主要原料，包括牛肉、豬胰臟和肝臟；將牛肉、豬胰臟和肝臟處理：去除筋膜、脂肪，肝臟和部分牛肉切成小塊，部分牛肉和豬胰臟剁碎備用；

2、制備基礎培養液1：將18Kg剁碎牛肉和30Kg蒸餾水裝入容器中，加熱到40⁰C，用20％NaOH調Ph8.2，加入剁碎豬胰臟4Kg和800mL氯仿，42⁰C放置3d，濃鹽酸調pH值5.4，煮沸過濾棄去肉渣備用；

制備基礎培養液2：將豬肝臟500g切片，加蒸餾水2500g，煮沸30min，過濾棄去肉渣備用；

制備基礎培養液3：切片牛肉500g，加蒸餾水2500g，煮沸30min，過濾棄去肉渣備用；

3、取500～1000mL基礎培養液1，胃蛋白胨40～50g，500～1000mL基礎培養液2,500～1000mL基礎培養液3，Na₂HPO₄H·H₂O?15～18g，NaCl?30g，氯化血紅素5～10g，維生素K0.5～1g，半胱氨酸鹽酸鹽2.5～5g，葡萄糖100～200g，調pH值7.4～7.8制得培養基。

本發明的積極效果是在壞死梭桿菌的培養過程中可降低成本，細菌生長旺盛，細菌產量大，價格低廉，適于疫苗生產或白細胞毒素提取。

具體實施方式：

下面結合實施例對本發明做進一步的描述：

實施例1：

1、收集并處理培養基主要原料，包括牛肉、豬胰臟和肝臟；將牛肉、豬胰臟和肝臟處理：去除筋膜、脂肪，肝臟和部分牛肉切成小塊，部分牛肉和豬胰臟剁碎備用；

2、制備基礎培養液1：將18Kg剁碎牛肉和30Kg蒸餾水裝入容器中，加熱到40⁰C，用20％NaOH調Ph8.2，加入剁碎豬胰臟4Kg和800mL氯仿，42⁰C放置3d，濃鹽酸調pH值5.4，煮沸過濾棄去肉渣備用；

制備基礎培養液2：將豬肝臟500g切片，加蒸餾水2500g，煮沸30min，過濾棄去肉渣備用；

制備基礎培養液3：切片牛肉500g，加蒸餾水2500g，煮沸30min，過濾棄去肉渣備用；

3、取500mL基礎培養液1，胃蛋白胨40g，500mL基礎培養液2,500mL基礎培養液3，Na₂HPO₄H·H₂O?15g，NaCl?30g，氯化血紅素5g，維生素K?0.5g，半胱氨酸鹽酸鹽2.5g，葡萄糖100g，調pH值7.4制得培養基。

實施例2：

1、收集并處理培養基主要原料，包括牛肉、豬胰臟和肝臟；將牛肉、豬胰臟和肝臟處理：去除筋膜、脂肪，肝臟和部分牛肉切成小塊，部分牛肉和豬胰臟剁碎備用；

2、制備基礎培養液1：將18Kg剁碎牛肉和30Kg蒸餾水裝入容器中，加熱到40⁰C，用20％NaOH調Ph8.2，加入剁碎豬胰臟4Kg和800mL氯仿，42⁰C放置3d，濃鹽酸調pH值5.4，煮沸過濾棄去肉渣備用；

制備基礎培養液2：將豬肝臟500g切片，加蒸餾水2500g，煮沸30min，過濾棄去肉渣備用；

制備基礎培養液3：切片牛肉500g，加蒸餾水2500g，煮沸30min，過濾棄去肉渣備用；