[發明專利]人TDP-43的單抗包被酶標板的制法及ELISA檢測試劑盒

無效

• 申請號: 200910063674.5
• 申請日: 2009-08-21
• 公開（公告）號: CN101634656A
• 公開（公告）日: 2010-01-27
• 發明（設計）人: 彭進洪;蘭萍
• 申請（專利權）人: 武漢三鷹生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/543;G01N33/535
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1、人TDP-43的單抗包被酶標板的制法，通過下列步驟制備而成：

(1)以BC001487DNA為模板，擴增TDP-43基因片段，與載體PET28a連接，轉化BL21，表達大量36KD?TDP-43蛋白片段；

(2)將36KD?TDP-43蛋白免疫小白鼠，取其脾細胞與鼠骨髓瘤細胞融合，選擇陽性雜交瘤細胞于鼠腹水中培養，純化蛋白得到抗TDP-43的單抗；

(3)將所得單抗用pH9.6的碳酸鹽緩沖溶液稀釋后包被96孔板，100μl/孔，4℃16-24小時，PBST洗滌3次，每次30秒，然后除盡孔內液體；

(4)用含8％小牛血清的pH7.4的PBS封閉，每孔200μl，37℃，2小時，PBST洗滌3次，干燥后密封；該板即為抗TDP-43的單抗包被的酶標板，可用于TDP-43的特異性檢測。

2、應用權利要求1所述的人TDP-43的單抗包被酶標板的ELISA檢測試劑盒，其特征為：由權利要求1所述的抗TDP-43的單抗包被的酶標板、TDP-43標準品、TDP-43的陽性對照樣品、抗TDP-43的多抗、樣品稀釋液、洗滌液、顯色液、終止液構成，具體組分為：(1)酶標板：由TDP-43的單抗包被；(2)樣品稀釋液：含8％小牛血清和1％抗人IgG的pH7.4的0.01mol/l?PBS；(3)洗滌液：pH7.4PBST；(4)酶標二抗：購自美國R&D?systems的辣根過氧化物酶(horseradish?peroxidase，HRP)標記的羊抗兔IgG；(5)TDP-43標準品：全長TDP-43的PBS溶液，TDP-43終濃度為1mg/ml；(6)TDP-43陽性對照樣品：全長TDP-43的PBS溶液，TDP-43終濃度為5μg/ml；(7)抗TDP-43的多抗：多抗的PBS溶液，多抗的終濃度為1mg/ml；(8)顯色液：TMB-H₂O₂系統；(9)終止液：2mol/l?H₂SO₄溶液。