[發明專利]特異性清除血液中病毒粒子的親和吸附柱及其制備方法

無效

• 申請號: 200910063627.0
• 申請日: 2009-08-14
• 公開（公告）號: CN101628135A
• 公開（公告）日: 2010-01-20
• 發明（設計）人: 王業富;李慧
• 申請（專利權）人: 武漢大學
• 主分類號: A61M1/38
• 分類號: A61M1/38;B01D15/08
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所
• 代理人: 黃瑞棠

技術領域

本發明涉及一種血液凈化的親和吸附柱，尤其涉及一種特異性清除血液中病毒粒子的親和吸附柱及其制備方法，能夠輔助或替代傳統的治療方法，成為一種新型的治療病毒性疾病的方法。

背景技術

病毒性疾病是常見的感染疾病，如乙型肝炎就是目前困擾人們的一種常見的病毒感染性疾病。病毒性肝炎是由多種肝炎病毒所致的一種以肝臟損傷為主的全身性急性或持續性傳染病。我國是乙型肝炎的高發區，人群總感染率高達60％，構成乙型肝炎傳染源的表面抗原攜帶者約為10％。全國乙型肝炎表面抗原攜帶者至少有1.2億，其中約10％最終轉化為各種慢性肝炎，包括慢性肝炎肝硬化和肝癌。現在我國慢性肝炎病人約為1200萬，每年肝病死亡人數約為30萬，其中16萬人死于肝癌。全世界1億丙型肝炎病毒感染攜帶者，我國就占3000萬到4000萬，加上其它型肝炎，可見病毒性肝炎給社會帶來了巨大經濟負擔以及對人類健康帶來的巨大影響。

目前治療病毒性肝病的方法有抗病毒藥物和干擾素，但成本高、療程長、副作用大。

研究發現乙肝患者的血液中含有大量的乙型肝炎表面抗原的DANE氏顆粒(HBsAg)，形成病毒血癥，為了治療這種病毒血癥，我們發現可以通過血液透析的方法把血液從人體動脈引出，將血漿中的乙型肝炎表面抗原與偶聯在載體上的抗乙型肝炎表面蛋白抗體特異性結合，來清除血漿中的乙型肝炎表面抗原，達到輔助清除病毒或治療的目的。

本課題組研究發現，同樣的方法也可適用于其它病毒血癥，如丙肝病毒血癥，人免疫缺陷病毒如艾滋病毒血癥等。

此外，實驗發現干擾素的療效與治療開始前血液病毒載量有關，病毒載量與療效負相關。因此，在抗病毒藥物應用之前快速降低血清病毒載量，可提高干擾素的效果，從而緩解或治愈患有病毒血癥的病人。

清除了病毒表面抗原及其包裹的病毒的血漿重新輸入人體內，這種方法在人體外對血液進行處理，沒有化學物質的刺激，毒副作用小，且無需輸入新鮮血漿或置換液，具有廣闊的臨床意義和市場前景。

發明內容

本發明的目的就在于克服現有技術存在的缺點和不足，而提供一種特異性清除血液中病毒粒子的親和吸附柱及其制備方法。本發明毒副性小，特異性強，能夠大量清除血液中的病毒，可輔助或替代傳統的治療方法。

本發明的目的是這樣實現的：

一、特異性清除血液中病毒粒子的親和吸附柱(簡稱親和吸附柱)

親和吸附柱包括吸附載體、活化劑和抗病毒表面蛋白抗體；

在吸附載體上加入活化劑得活化載體，在活化載體中加入抗病毒表面蛋白抗體進行抗體偶聯得免疫吸附劑，免疫吸附劑裝入吸附柱即得親和吸附柱。

1、吸附載體

吸附載體是一種臨床常用的血液凈化材料，包括樹脂、玻璃纖維、淀粉微球、大孔共聚物、活性炭等。

2、活化劑

活化劑為1，4-二羥基正丁烷雙縮水甘油醚(1，4-Butanediol?DiglycidylEther，簡稱BDDE)。

BDDE的結構和作用機制：

BDDE是一個長鏈分子，雙環氧基中的一個與載體上的羥基反應，另一個環氧基與載體之間存在一個“長臂”，正是這個“長臂”結構極大地影響了免疫吸附劑對抗體的吸附性能，即利用相同結構的長臂之間的斥力，使活性基團呈“放射狀”處于載體表面，在一定程度上減少了抗體分子中大量氨基所可能導致的“多點結合”，保持偶聯抗體的正常結構，保持其活性。

BDDE在載體表面引入活潑的環氧基，可與抗體中的氨基反應，通過共價鍵將抗體偶聯在載體表面，得到免疫吸附劑。

3、抗病毒表面蛋白抗體

抗病毒表面蛋白抗體是一種與病毒表面蛋白特異性結合的蛋白質；其作用原理是通過抗體與抗原的特異性結合將病毒粒從血漿中清除。

其來源是：

通過單克隆抗體技術制備抗病毒表面蛋白抗體(Ab)。

親和吸附柱的工作原理：

親和吸附作為一種生物分離技術，可用于血液凈化和治療免疫性疾病。親和吸附柱是利用抗原和抗體之間特異性結合的性質，將抗病毒表面蛋白抗體偶聯在吸附載體上形成親和吸附柱。將血液從動脈輸出，經過孔徑適宜的分離膜將血細胞、蛋白和血漿分離，病毒粒子主要留在血漿中。將血漿通過親和吸附柱，血漿中的病毒表面蛋白和抗病毒表面蛋白抗體結合，從而將病毒粒子從血漿中清除，將清除過病毒粒的血漿回輸到人體內。吸附有病毒粒的親和吸附柱可以通過洗脫的辦法，將病毒粒從親和吸附柱上洗脫下來，親和吸附柱就可重復使用。

二、親和吸附柱的制備方法

親和吸附柱的制備方法包括下列步驟：

①活化載體