[發(fā)明專利]一種表達(dá)人工修飾合成的甲型H1N1流感病毒HA-NA-M1基因的重組桿狀病毒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910063217.6
• 申請(qǐng)日: 2009-07-21
• 公開（公告）號(hào): CN101624580A
• 公開（公告）日: 2010-01-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 錢平;李祥敏;金梅林;陳煥春
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N7/01
• 分類號(hào): C12N7/01;C07K14/11;A61K48/00;A61K39/145;A61P31/16;C12R1/93
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務(wù)所
• 代理人: 王敏鋒

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及病毒學(xué)領(lǐng)域。更具體地，本發(fā)明涉及一種新的含有人工修飾合成的甲型H1N1流感病毒主 要免疫原性基因HA-NA-M1和標(biāo)記基因eGFP的重組桿狀病毒株，這種重組毒株標(biāo)記基因eGFP和甲型H1N1 流感病毒HA-NA-M1蛋白，并包裝成流感樣病毒顆粒。該病毒顆粒研制的疫苗可以預(yù)防人和豬甲型H1N1流 感病毒的感染。

背景技術(shù)

甲型H1N1流感(Influenza?virus?H1N1)是引起人和豬的呼吸道疾病的重要原發(fā)病原之一，常常與 其他病原混合感染造成更嚴(yán)重的損失。該病毒屬于正粘病毒科流感病毒屬，根據(jù)病毒核蛋白抗原性不同， 分為甲、乙和丙三個(gè)型(國(guó)際稱其為A、B和C三個(gè)型)。甲型流感病毒(influenza?virus，IV)為有囊 膜的RNA病毒，其囊膜主要由血凝素(HA)、神經(jīng)氨酸酶(NA)以及基質(zhì)蛋白(M1)構(gòu)成。

甲型流感病毒危害巨大，不但影響畜牧業(yè)(尤其養(yǎng)禽業(yè))健康發(fā)展，更重要的是可以引起人類的流感 大暴發(fā)，產(chǎn)生重要的公共衛(wèi)生危害。人類歷史上發(fā)生過3次流感大暴發(fā)，即1918年由H1N1亞型流感病毒 引起的西班牙流感、1957年由H2N2亞型流感病毒引起的香港流感和1968年由H3N2亞型流感病毒引起的 亞洲流感。其病原均由當(dāng)時(shí)存在于禽類的甲型流感病毒直接突變或和人的流感病毒在豬體內(nèi)重組而來，如 1918年西班牙流感病毒H1N1的HA和NA基因分別具有豬流感病毒和禽流感病毒的分子特征。2009年4月 出現(xiàn)甲型H1N1流感病毒是一種新型變異流感病毒。這種新的甲型流感病毒HA、NP和NS基因來源于與1918 年人流感病毒密切相關(guān)的經(jīng)典豬流感病毒；NA和M來自于1979年引入的歐洲豬流感病毒；PB1來自人的 H3N2；PB2和PA來源于禽流感，該流感在1998年前后引入到豬體(Chang?LY，et?al.Novel?Swine-origin Influenza?Virus?A(H1N1)：The?First?Pandemic?ofthe?21^st?Century.J?Formos?Med?Assoc，2009；108(7)：526-623)。

目前甲型H1N1流感幾乎從美洲蔓延至世界各地，傳播途徑既可以動(dòng)物傳人，也可以人傳人。截至2009 年7月6日，目前全球已有94512人感染，429人死亡 (http://www.who.int/csr/don/2009_07_06/en/index.html)；高效疫苗和抗病毒藥物預(yù)防控制甲型H1N1 流感病毒有效措施。現(xiàn)階段治療甲型H1N1流感病毒最有效途徑是抗病毒藥物治療，目前使用較多的是 oseltamivir(又稱Tamiflu)和zanamivir，但是目前在丹麥、日本、美國(guó)、中國(guó)香港等國(guó)家和地區(qū)發(fā)現(xiàn)抗Tamiflu 耐藥毒株(http://www.who.int/csr/disease/swineflu/notes/h1n1_antiviral_resistance_20090708/en/index.html)， 從而增加了該疾病帶來的危險(xiǎn)，該領(lǐng)域迫切需要有效的疫苗來預(yù)防控制該甲型H1N1流感病毒。迄今為止， 還沒有商品化的疫苗問世，而傳統(tǒng)的季節(jié)性流感疫苗不能有效預(yù)防該新型流感病毒。據(jù)WHO報(bào)道常規(guī)滅活 疫苗目前正在加緊研制，還沒有問世(http://www.who.int/csr/disease/swineflu/notes/h1n1_vaccine_20090713/en/index.html)，新型疫苗還未見報(bào)道。因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)出具有高效、安 全的針對(duì)甲型H1N1流感的基因工程疫苗。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的就是提供編碼甲型H1N1人工修飾合成的免疫原性基因cDNA序列。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種轉(zhuǎn)移載體pFBDPHmHNM1P10eGFP，該載體含有編碼具有甲型H1N1 流感病毒免疫原性基因HA-NA-M1的cDNA序列和標(biāo)記基因eGFP。