[發明專利]一種表達人工修飾合成的甲型H1N1流感病毒HA-NA-M1基因的重組桿狀病毒

有效

• 申請號: 200910063217.6
• 申請日: 2009-07-21
• 公開（公告）號: CN101624580A
• 公開（公告）日: 2010-01-13
• 發明（設計）人: 錢平;李祥敏;金梅林;陳煥春
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C07K14/11;A61K48/00;A61K39/145;A61P31/16;C12R1/93
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所
• 代理人: 王敏鋒

技術領域

本發明涉及病毒學領域。更具體地，本發明涉及一種新的含有人工修飾合成的甲型H1N1流感病毒主 要免疫原性基因HA-NA-M1和標記基因eGFP的重組桿狀病毒株，這種重組毒株標記基因eGFP和甲型H1N1 流感病毒HA-NA-M1蛋白，并包裝成流感樣病毒顆粒。該病毒顆粒研制的疫苗可以預防人和豬甲型H1N1流 感病毒的感染。

背景技術

甲型H1N1流感(Influenza?virus?H1N1)是引起人和豬的呼吸道疾病的重要原發病原之一，常常與 其他病原混合感染造成更嚴重的損失。該病毒屬于正粘病毒科流感病毒屬，根據病毒核蛋白抗原性不同， 分為甲、乙和丙三個型(國際稱其為A、B和C三個型)。甲型流感病毒(influenza?virus，IV)為有囊 膜的RNA病毒，其囊膜主要由血凝素(HA)、神經氨酸酶(NA)以及基質蛋白(M1)構成。

甲型流感病毒危害巨大，不但影響畜牧業(尤其養禽業)健康發展，更重要的是可以引起人類的流感 大暴發，產生重要的公共衛生危害。人類歷史上發生過3次流感大暴發，即1918年由H1N1亞型流感病毒 引起的西班牙流感、1957年由H2N2亞型流感病毒引起的香港流感和1968年由H3N2亞型流感病毒引起的 亞洲流感。其病原均由當時存在于禽類的甲型流感病毒直接突變或和人的流感病毒在豬體內重組而來，如 1918年西班牙流感病毒H1N1的HA和NA基因分別具有豬流感病毒和禽流感病毒的分子特征。2009年4月 出現甲型H1N1流感病毒是一種新型變異流感病毒。這種新的甲型流感病毒HA、NP和NS基因來源于與1918 年人流感病毒密切相關的經典豬流感病毒；NA和M來自于1979年引入的歐洲豬流感病毒；PB1來自人的 H3N2；PB2和PA來源于禽流感，該流感在1998年前后引入到豬體(Chang?LY，et?al.Novel?Swine-origin Influenza?Virus?A(H1N1)：The?First?Pandemic?ofthe?21^st?Century.J?Formos?Med?Assoc，2009；108(7)：526-623)。

目前甲型H1N1流感幾乎從美洲蔓延至世界各地，傳播途徑既可以動物傳人，也可以人傳人。截至2009 年7月6日，目前全球已有94512人感染，429人死亡 (http://www.who.int/csr/don/2009_07_06/en/index.html)；高效疫苗和抗病毒藥物預防控制甲型H1N1 流感病毒有效措施。現階段治療甲型H1N1流感病毒最有效途徑是抗病毒藥物治療，目前使用較多的是 oseltamivir(又稱Tamiflu)和zanamivir，但是目前在丹麥、日本、美國、中國香港等國家和地區發現抗Tamiflu 耐藥毒株(http://www.who.int/csr/disease/swineflu/notes/h1n1_antiviral_resistance_20090708/en/index.html)， 從而增加了該疾病帶來的危險，該領域迫切需要有效的疫苗來預防控制該甲型H1N1流感病毒。迄今為止， 還沒有商品化的疫苗問世，而傳統的季節性流感疫苗不能有效預防該新型流感病毒。據WHO報道常規滅活 疫苗目前正在加緊研制，還沒有問世(http://www.who.int/csr/disease/swineflu/notes/h1n1_vaccine_20090713/en/index.html)，新型疫苗還未見報道。因此，本領域迫切需要開發出具有高效、安 全的針對甲型H1N1流感的基因工程疫苗。

發明內容

本發明的一個目的就是提供編碼甲型H1N1人工修飾合成的免疫原性基因cDNA序列。

本發明的另一個目的是提供一種轉移載體pFBDPHmHNM1P10eGFP，該載體含有編碼具有甲型H1N1 流感病毒免疫原性基因HA-NA-M1的cDNA序列和標記基因eGFP。