[發明專利]雞快慢羽分子鑒定方法

無效

• 申請號: 200910062895.0
• 申請日: 2009-07-02
• 公開（公告）號: CN101619354A
• 公開（公告）日: 2010-01-06
• 發明（設計）人: 龔炎長;彭秀麗;李世軍;俸艷萍;陳忠
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所
• 代理人: 王敏鋒

技術領域

本發明屬于動物育種技術領域，具體涉及一種雞的快慢羽分子鑒定方法。

背景技術

雌雄鑒別是現代養雞生產中的重要技術，在商品蛋雞生產中，雛雞出殼時即通過雌雄鑒別淘汰公雛以節省飼養公雛的空間和飼養成本，提高母雞的成活率；在肉雞生產中，通過雌雄鑒別進行公母分養，便于根據公母不同的生長發育速度、營養需求給予不同的飼料和飼養管理條件；對于種雞，可通過雌雄鑒別僅給下游祖代、父母代雞場提供單性別的種雛雞保護育種成果。目前常用的雌雄鑒別方法包括翻肛鑒定和自別雌雄兩類；翻肛鑒定利用公、母雛退化交尾器的差別，通過目測進行鑒別(一般需對雌雄鑒別員進行特殊培訓)；而自別雌雄則利用位于雞性染色體(Z染色體)上基因的伴性交叉遺傳現象，根據雛雞出殼時的表型差異鑒定出殼雛雞的性別。當前最廣泛用于自別雌雄的基因位點包括金銀羽(S-s)位點及快慢羽(K-k)位點，但金銀羽位點僅在洛島紅背景的雞群中可以使用，而快慢羽位點則不受雞品種遺傳背景限制。快慢羽位點位于Z染色體上，其中慢羽(K)對快羽(k)為顯性，利用快羽公雞(Z^kZ^k)與慢羽母雞(Z^KW)交配，后代公雛全為慢羽(Z^KZ^k)，母雛全為快羽(Z^kW)。快慢羽表型在雛雞出殼24小時以內按如下方式鑒定：快羽型：主翼羽長于覆主翼羽2mm以上(相對長度)；其余為慢羽型。利用快慢羽進行雞自別雌雄不受雞品種遺傳背景限制；相對于翻肛性別鑒定方法，其鑒別速度快，準確率高，不需要對鑒別人員進行技術培訓，對雛雞損傷小，交叉感染疾病的可能性小，因而在雞雌雄鑒別中被廣泛使用。

雖然快慢羽自別雌雄在鑒定方法上比翻肛雌雄鑒別技術容易的多，但利用表型鑒定雞的快慢羽在應用于雛雞自別雌雄時除鑒別準確率因鑒別誤差有時不能達到100％外，最主要的問題是能進行準確鑒定的時間有一定的限制，一般不能超過出殼后24小時。因此在快慢羽自別雌雄配套系建系時需從雛雞開始，需要2-3個世代才能形成后代達到一定自別雌雄準確率(一般要求99％以上)的配套系。這就造成快慢羽配套系培育過程復雜(涉及到譜系孵化、羽型鑒定及測交等繁瑣過程)，周期較長，建系投入較大，使這項技術推廣應用受到限制，因此很多企業目前仍采用翻肛雌雄鑒別。

早期研究證明ev-21(Endogenous?Virus-21，內生病毒-21)與初生雛雞的羽毛生長速度有關系，并認為ev-21的插入造成雛雞羽毛著生速度緩慢，是快慢羽的控制基因。Tixier-Boichard等(1994)利用PCR技術通過檢測是否有ev-21插入來鑒定快慢羽表型，發現有少量快羽個體有ev-21的插入，另外也有少數慢羽個體沒有ev-21插入，(Tixier-Boichard?MH，Benkel?BF，Chambers?JR，Gavora?JS：Screening?chickens?for?endogenous?virus?ev21?viral?element?by?the?polymerase?chain?reaction.Poult?Sci?1994，73(10)：1612-1616.)，表明ev-21位點并不是雞快慢羽表型的控制位點，而只是一個與快慢羽位點緊密連鎖的位點。Elferink等(2008)發現了快羽等位基因與慢羽等位基因之間的差異(Partial?duplication?of?the?PRLR?and?SPEF2?genes?at?the?late?feathering?locus?inchicken.BMC?Genomics.2008；9：391)，揭示了K位點的特點(見圖1)，給我們利用分子標記方法準確鑒定快慢羽表型提供了可能性。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種雞快慢羽的分子鑒定方法。本方法可不受時間限制，準確鑒定雞快慢羽表型，從而縮短快慢羽自別雌雄配套系建系時間、減少投入。

實現本發明的技術方案如下：

1)利用在雞Z染色體上找到K基因位點附近相關序列(Z染色體9960Kbp-10140Kbp之間的核苷酸序列)，根據快慢羽等位基因的結構設計兩對引物對。

其中：

快慢羽都能擴增出來的質控內標引物的核苷酸序列如下：

CONTROL(對照)正向引物：5’GTGTTGTCCCAGCACTCCTT?3’，

CONTROL(對照)反向引物：5’GTTGAATCTTAGTCAGCAGCGT?3’；