[發明專利]豬MHCⅡTA基因作為免疫相關分子標記的鑒定與應用

無效

• 申請號: 200910062622.6
• 申請日: 2009-06-12
• 公開（公告）號: CN101570789A
• 公開（公告）日: 2009-11-04
• 發明（設計）人: 趙書紅;劉向東;李新云;程文科;余梅;朱猛進;李長春;曹建華;李世軍
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所
• 代理人: 王敏鋒

技術領域

本發明屬于家畜分子標記制備技術領域，具體涉及一種豬MHCIITA基因作為免疫相關分子標記的鑒 定與應用。

背景技術

豬肉是我國居民最主要的動物蛋白質食物來源，家豬在畜牧業中占有舉足輕重的地位。數十年來，家 豬遺傳改良成效顯著，但主要針對的是生產性狀，即生長性狀與繁殖性狀等。相對于生產性狀，針對豬的 健康及抵抗疾病能力的研究卻較為薄弱。以高瘦肉型豬為目標的近現代育種使相關等位基因丟失或頻率降 低而導致現代商業品種的體質和抗病能力急劇下降。隨著集約化飼養方式的普及，豬病特別是一些呼吸系 統與繁殖系統的傳染病給養豬生產帶來了巨大的經濟損失，疾病已成為現代養豬業的最大威脅之一，嚴重 制約的中國養豬業的健康發展。可喜的是，越來越多的畜牧工作者開始意識到提高豬群健康以維持穩定生 產的重要性。

面對目前養豬生產中生產性狀的提高和抗病性下降的矛盾，僅僅依靠藥物和疫苗既加大了養豬成本， 又給食品安全帶來了隱患，因此，這需要我們尋找更加有效的方法來提高豬群的抗病能力和健康水平。在 對家畜的長期觀察中人們發現，并非所有感染病原微生物的動物都發病，而且已有研究表明部分豬對引起 仔豬腹瀉的腸毒性大腸桿菌K88具有天然抗性，而這些豬對疾病的抵抗是受遺傳控制的。由此可知動物傳 染性疾病的發生與動物本身的遺傳背景是密切相關的。從長遠角度來看，采用遺傳學方法來提高豬群健康 水平和抗病能力是治本的策略，而篩選與鑒定豬免疫力相關基因與分子標記是這項工作的基礎和關鍵。因 此，尋求免疫抗病基因進行育種，提高豬群先天抗病能力是當前發展豬育種工作的大勢所趨。MHCIITA 基因就是一個與機體抗病和免疫力密切相關的關鍵基因。

MHCIITA(MHC?class?II?transactivator)是調節主要組織相容性復合體II類分子(MHCII)的分子開關。 主要組織相容性復合體(Major?Histocompatibility?Complex，MHC)是與抗病性和免疫應答密切相關的一組 基因群。豬的MHC(命名為SLA)位于豬的7號染色體上，有I和II兩種類型。MHC?II類分子在體內主 要發揮抗原遞呈作用，在誘發獲得性免疫反應中起核心作用，MHCII類分子的異常表達通常會引起嚴重的 免疫缺陷疾病，如淋巴細胞綜合征(BLS)等。與MHC?II類分子相一致，僅抗原遞呈細胞可以組成性表達 MHCIITA，但是其它各種細胞可以誘導表達MHCIITA。

MHCIITA在與MHCII類分子有關的免疫反應中發揮重要作用。有研究表明病原體逃脫免疫系統的途 徑涉及到對MHCIITA表達的調節。比如巨細胞病毒通過改變IFN-γ信號轉導途徑而下調MHCIITA的表達， 這樣降低了MHCII類的免疫刺激作用。小鼠巨噬細胞受到牛分枝桿菌BCG感染時，其基因產物可抑制 IFN-γ介導的STAT-1的磷酸化，導致MHCIITA和MHCII類分子的表達降低。衣原體通過使上游刺激因子 1變性而干擾了MHCIITA基因的轉錄。因此，MHCIITA基因在機體抵抗各種病原的過程中發揮重要作用。

目前為止，關于豬MHCIITA基因的研究很少，且沒有關于其遺傳多態性的相關研究報道。因此，介 于MHCIITA在機體抗病免疫反應中發揮的重要作用，申請人選擇了該基因并對其進行了相關研究和免疫 性狀關聯分析。申請人通過克隆MHCIITA的部分序列，并利用軟件對測序結果進行分析，在該基因3′UTR 區鑒定出9個SNP位點。選取了其中位于第188bp的C188-T188堿基突變位點，對其做了與免疫性狀的 關聯分析，同時，進一步檢測了該突變在國內外6個豬血緣中的遺傳多樣性；從而，成功地鑒定出了一個 新的與豬免疫力相關的分子標記。

發明內容

本發明的目的在于克隆一種豬MHCIITA基因作為免疫相關分子標記，并將其應用于豬分子標記輔助 育種，以期獲得較高的社會和經濟效益。

本發明通過以下技術方案實現：

申請人克隆得到一種與豬免疫力相關的分子標記，它是序列表SEQ?ID?NO：2所示的核苷酸序列。在 序列表SEQ?ID?NO：2的第188bp處發現1個C188-T188的堿基突變，導致PvuII-RFLP多態性。

其中，克隆豬MHCIITA基因的編碼區(CDS)引物對的和核苷酸序列如下：

正向引物：5′-TGGTGACTGGCACTTTCCT-3′，反向引物：5′-TGAGCATTGGGTGGGG-3′。