[發明專利]利用植物甾醇生產納豆激酶脂質體的方法

有效

• 申請號: 200910062277.6
• 申請日: 2009-05-27
• 公開（公告）號: CN101559039A
• 公開（公告）日: 2009-10-21
• 發明（設計）人: 董緒燕;陳洪;魏芳;袁鋼友;李光明;趙元弟
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61K38/48;A61K47/28;A61P7/02
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司
• 代理人: 黃行軍

技術領域

本發明涉及一種生產納豆激酶脂質體的方法。

背景技術

納豆激酶由納豆菌發酵產生，其分子量遠小于尿激酶、鏈激酶、組織型纖溶酶原激活劑，可由腸道自然吸收。納豆激酶的體外、體內溶栓功能通過實驗也已得到確定：納豆激酶的體內溶栓活性是纖溶酶血纖維蛋白溶酶的四倍，在體內作用持續時間長，最重要的一點是它還能激活人體內的組織型纖溶酶原激活劑，使之溫和、持續地提高血液的纖溶活性。納豆激酶能夠降低纖維蛋白及血小板凝集率，預防動脈硬化，對血栓性疾病有改善作用。近年來，國內外對納豆激酶的性質、作用機理、分離純化等方面都進行了大量研究，許多國家已相繼推出以納豆激酶為原料的產品，多以口服膠囊的形式。但是利用度較低，產生的是全身作用。而將納豆激酶制備為脂質體，靜脈注射或口服，能直接作用于血管中的血栓；且可以降低納豆激酶在其他組織器官中的濃度，降低藥物副作用。

脂質體是一種定向藥物載體，由磷脂、膽固醇等為膜材包合而成，屬于靶向給藥系統的一種新劑型。它可以增強藥物的親細胞性，降低不必要的系統毒性，增強脂溶性藥物在體液中的溶解性，調節藥物釋放模式。在藥物研發的許多領域中都應用脂質體作為載體，并取得了很大進展。將納豆激酶制成脂質體，可以提高其在體內的半衰期，降低用藥劑量，提高用藥的安全性。但是膽固醇在體內過量時會導致高膽固醇血癥，對機體產生不利的影響。

目前脂質體的合成方法有注入法、超聲波分散法、逆相蒸發法、冷凍干燥法、薄膜分散法等。

發明內容

本發明的目的在于提供一種利用植物甾醇生產納豆激酶脂質體的方法，該方法工藝簡單，該方法生產的納豆激酶脂質體能減少膽固醇對人體的影響。

為了實現上述目的，本發明的技術方案是：利用植物甾醇生產納豆激酶脂質體的方法，其特征在于它包括如下步驟：

1)原料的選?。喊绰蚜字弥参镧薮肌靡颐选镁彌_液∶納豆激酶溶液＝100～300mg∶90～200mg∶2～5mL∶5～10mL∶5～10mL，選取卵磷脂、植物甾醇、乙醚、緩沖液和納豆激酶溶液，備用；

所述的緩沖液由甘露醇溶解于磷酸緩沖液中而成，磷酸緩沖液∶甘露醇＝5～10mL∶200～400mg，緩沖液的pH為7.4；

所述的納豆激酶溶液中納豆激酶的酶活性為：1000～5000U/mL；

2)空白脂質體的制備：將卵磷脂、植物甾醇和乙醚混合，然后旋轉蒸發使其成均勻類脂薄膜覆蓋在梨形瓶內底部，向瓶中加入緩沖液，加入玻璃珠，在60℃下旋轉震蕩30～90min后，水浴超聲10～20min，然后冷凍干燥，得脂質體前體物質；

3)水合：取納豆激酶溶液，加入到脂質體前體物質中，氮氣流下水合10～20min，得到納豆激酶脂質體。

所述的植物甾醇為豆甾醇、谷甾醇、菜油甾醇、谷甾烷醇或菜油烷醇中的任意一種或任意二種以上(含二種)的混合，任意二種以上(含二種)混合時為任意配比。

所述的超聲的條件是：頻率40Hz、功率500W。

所述的冷凍干燥的條件是：-10～0℃，1mbar，干燥時間10～20小時。

本發明的有益效果是：

1)制作簡單：本發明制作工藝簡單，不需要復雜設備；

2)采用植物甾醇作為膜材，植物甾醇具有與膽固醇類似的結構，它不但是形成脂質體雙分子層的基礎物質，而且能有效降低有害低密度膽固醇的水平(減少了膽固醇對人體的影響)，起到預防心血管疾病的作用。利用植物甾醇生產納豆激酶脂質體能夠兼具植物甾醇和納豆激酶的功效，對高血脂和心腦血管疾病具有重要的作用。

3)本發明制備得到的納豆激酶脂質體，包封率高(44.4％～64.4％)，粒徑較小(100～300nm)，粒徑分布范圍窄，釋放速度快，且釋放完全；

4)納豆激酶脂質體易于被人體吸收，可以有效避免胃腸的干擾。制備的納豆激酶脂質體所用到的脂材毒性小，生物相溶性好，沒有免疫反應。

5)納豆激酶脂質體可以提高納豆激酶在體內的半衰期，降低用藥劑量，提高用藥的安全性，既能延長納豆激酶在體內的作用時間，又能迅速的發揮溶栓作用，達到理想的溶栓效果。

6)提高藥物穩定性，將植物甾醇和納豆激酶制成脂質體，受到類脂雙分子層膜的保護，可以顯著提高其穩定性。同時在進入體內之后，由于脂質體膜的保護，藥物可以免受機體酶系統和免疫系統的降解。

本發明制備的納豆激酶脂質體經掃描電鏡觀察，為規則的圓形、無粘性。動態光散射測定脂質體的Zeta電位為-(51±3)mV，平均粒徑為194.1nm的單室脂質體。