[發(fā)明專利]豬繁殖與呼吸綜合征病毒嵌合重組疫苗株及其生產(chǎn)活疫苗的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910062139.8
• 申請日: 2009-05-18
• 公開（公告）號: CN101603035A
• 公開（公告）日: 2009-12-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 寧宜寶;張學(xué)賢;漆世華;沈青春;溫文生;劉業(yè)兵;楊雷;韓明遠(yuǎn);舒銀輝;張志學(xué);高和義
• 申請（專利權(quán)）人: 中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所;美國PROTATEK國際股份有限公司;武漢中博生化有限公司
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;A61K39/12;A61P31/14;C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
• 代理公司: 武漢開元知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 唐正玉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于獸用生物制品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用基因重組技術(shù)構(gòu)建弱毒活疫苗株并用該毒株生產(chǎn)豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗的方法。

背景技術(shù)

豬藍(lán)耳病是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的以母豬發(fā)熱、流產(chǎn)，斷奶前后仔豬死亡率升高，不同年齡豬呼吸障礙等為臨床特征的疾病。1991年，荷蘭學(xué)者Terpstra等人在感染豬體內(nèi)分離到歐洲型PRRSV，命名為Lelystad病毒(Lv)；同年，美國學(xué)者Benfield等人分離到美洲型PRRSV，命名為VR-2332。近年來，我國學(xué)者相繼分離鑒定了美洲型PRRSV的CH-1a、S1、HB-1和HB-2等毒株。

豬“高熱病”是新近在我國發(fā)生的重大動物疫病，此前在國內(nèi)外均無相關(guān)研究報道。寧宜寶等經(jīng)過大量的實(shí)驗(yàn)證實(shí)了豬藍(lán)耳病病毒感染是導(dǎo)致高熱病的主要原因。并首先在國內(nèi)做了報道。

國內(nèi)外針對傳統(tǒng)豬藍(lán)耳病的診斷和疫苗免疫防治技術(shù)已有大量研究成果，但這些現(xiàn)有技術(shù)不能滿足我國新出現(xiàn)的高致病性豬藍(lán)耳病防控需要，必須有針對性地研究專門針對高致病性豬藍(lán)耳病的疫苗產(chǎn)品和鑒別診斷技術(shù)。

大量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)證明：人工傳代致弱的豬藍(lán)耳病活疫苗具有較好的免疫力、免疫期長等優(yōu)點(diǎn)，但因在一些豬場使用后出現(xiàn)了藍(lán)耳病問題，其安全問題引起了人們的普遍關(guān)注。在使用弱毒疫苗時，出于疫苗對豬安全原因的考慮，一般只是建議在發(fā)生過豬藍(lán)耳病的區(qū)域使用，而不建議在未發(fā)生過豬藍(lán)耳病的養(yǎng)殖場使用。在歐盟之所以禁止用活疫苗來預(yù)防豬藍(lán)耳病，也是因?yàn)樵?jīng)在一些豬場使用弱毒活疫苗后爆發(fā)了藍(lán)耳病。美國在藍(lán)耳病活疫苗的使用上同樣非常謹(jǐn)慎。美洲其他一些國家和亞洲地區(qū)各國雖然不反對在豬藍(lán)耳病流行地區(qū)使用人工傳代致弱的豬藍(lán)耳病活疫苗，但不提倡在未發(fā)生豬藍(lán)耳病的豬場使用弱毒疫苗。滅活疫苗由于病原被滅活了，不存在散毒的問題，相對活疫苗來說，安全性要好一些，但是與活疫苗相比，免疫效果差，免疫期也短。在我國高致病性豬藍(lán)耳病滅活疫苗使用的結(jié)果證明：在已經(jīng)發(fā)生豬藍(lán)耳病地區(qū)，由于豬體本身可能已經(jīng)感染豬藍(lán)耳病病毒，滅活疫苗免疫后不但起不到防病的作用，反而會引起一定的副反應(yīng)。在疫苗使用對象上說，和活疫苗不同的是，滅活疫苗最好是在未?發(fā)生豬藍(lán)耳病的地區(qū)使用。

和經(jīng)典的豬藍(lán)耳病不同，高致病性豬藍(lán)耳病是由高變異豬藍(lán)耳病毒株引起的，無論是經(jīng)典的活疫苗，還是滅活疫苗，均不能預(yù)防該病的發(fā)生。因此，為了有效預(yù)防控制高致病性豬藍(lán)耳病，疫苗研究是當(dāng)務(wù)之急。根據(jù)經(jīng)典株疫苗研究的經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)，非常有必要開展新型基因工程疫苗的研究。

1、豬藍(lán)耳病常規(guī)疫苗：

隨著豬藍(lán)耳病的發(fā)現(xiàn)，豬藍(lán)耳病的疫苗研究也就隨之開展，盡管大家對現(xiàn)有豬藍(lán)耳病疫苗的免疫效果評價不一。目前國內(nèi)外已經(jīng)商品化的豬藍(lán)耳病疫苗有滅活疫苗和弱毒活疫苗兩類。基因工程疫苗研究也已出現(xiàn)積極發(fā)展的趨勢。

1.1豬藍(lán)耳病弱毒活疫苗：

在經(jīng)典豬藍(lán)耳病弱毒活疫苗方面，美國Boehringer?Ingleheim公司于1995年首次推出商品化減毒疫苗Resp?PRRS/ReproTM，已獲準(zhǔn)用于3～18周齡豬的預(yù)防接種。隨后多個單位均推出了豬藍(lán)耳病弱毒疫苗。目前西班牙、荷蘭、美國和中國已研制出豬藍(lán)耳病弱毒活疫苗并商品化。可供各階段豬群使用，但主要供3～18周齡的仔豬接種使用，用于防制豬藍(lán)耳病的呼吸障礙。據(jù)報道，接種豬藍(lán)耳病弱毒疫苗后第110天用同源強(qiáng)毒攻擊，動物可得到完全保護(hù)，而且對強(qiáng)毒攻擊的保護(hù)甚至是終生的。架子豬接種7天后就激發(fā)保護(hù)性免疫應(yīng)答，并可持續(xù)16周以上，與未接種的對照豬相比，接種豬攻毒后排毒時間減少，肺部病變減輕，生長發(fā)育良好。然而，多數(shù)報道認(rèn)為豬藍(lán)耳病弱毒活疫苗存在安全問題。Botner等報道，在丹麥，對1000多頭豬藍(lán)耳病血清學(xué)陰性豬使用了弱毒疫苗，可是不久后豬群發(fā)生了豬藍(lán)耳病，而且從流產(chǎn)胎兒和死胎中分離到了疫苗病毒，發(fā)現(xiàn)疫苗病毒可經(jīng)胎盤感染胎兒，并向未接種的母豬傳播，有些豬群則表現(xiàn)出急性豬藍(lán)耳病樣綜合癥狀。也有研究者用該疫苗接種公豬，隨后以強(qiáng)毒攻擊，發(fā)現(xiàn)有精液排毒和精液質(zhì)量下降等現(xiàn)象。