[發明專利]一種檢測結核桿菌的方法

有效

• 申請號: 200910057773.2
• 申請日: 2009-08-20
• 公開（公告）號: CN101995464A
• 公開（公告）日: 2011-03-30
• 發明（設計）人: 胡志能;楊揮
• 申請（專利權）人: 上海英伯肯醫學生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;C12Q1/04;C12R1/32
• 代理公司: 上海浦一知識產權代理有限公司 31211
• 代理人: 王函

1.一種檢測結核桿菌的方法，包括以下步驟：

1)將結核桿菌溫育培養以擴增結核桿菌；

2)在結核桿菌中加入噬菌體，溫育后裂解細菌；

3)用抗噬菌體的抗體標金，制備噬菌體膠體金法免疫層析測試筆，用該測試筆檢測噬菌體。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3)中所述測試筆中膠體金標記的抗體為識別結核桿菌噬菌體頭部蛋白的抗體，測試線上固定的抗體是識別結核桿菌噬菌體頭部蛋白的抗體。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3)中所述測試筆中膠體金標記的抗體為識別結核桿菌噬菌體尾部蛋白的抗體，測試線上固定的抗體是識別結核桿菌噬菌體尾部蛋白的抗體。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3)中所述測試筆中膠體金標記的抗體為識別結核桿菌噬菌體頭部蛋白的抗體，測試線上固定的抗體是識別結核桿菌噬菌體尾部蛋白的抗體。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3)中所述測試筆中膠體金標記的抗體為識別結核桿菌噬菌體尾部蛋白的抗體，測試線上固定的抗體是識別結核桿菌噬菌體頭部蛋白的抗體。

6.如權利要求2、4和5中任一項所述的方法，其特征在于，所述識別結核桿菌噬菌體頭部蛋白的抗體特異結合結核桿菌噬菌體頭部蛋白，該結核桿菌噬菌體頭部蛋白片段具有SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列和SEQID?NO.2所示的氨基酸序列。

7.如權利要求3-5任一項所述的方法，其特征在于，所述識別結核桿菌噬菌體尾部蛋白的抗體特異結合結核桿菌噬菌體尾部蛋白，該結核桿菌噬菌體尾部蛋白片段具有SEQ?ID?NO：3所示的核苷酸序列和SEQ?ID?NO.4所示的氨基酸序列。

8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)具體分兩步：

a)用4％的NaOH溶液室溫處理待檢樣品20分鐘，離心去上清；

b)加入增菌液，37℃培養25小時，離心去上清，再加入增菌液重懸結核桿菌。

9.如權利要求8所述的方法，其特征在于，所述增菌液由米氏7H9培養基5-7重量份、氯化鈣1-2重量份、氨芐青霉素25-50重量份、兩性霉素B?25-50重量份、牛血清白蛋白100-200重量份、葡萄糖10-15重量份、油酸1-2重量份和過氧化氫酶0.1-0.2重量份，均溶于1000重量份的純水中制備而成。