[發明專利]具有環狀八肽結構的藍萼甲素衍生物及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 200910056455.4
• 申請日: 2009-08-14
• 公開（公告）號: CN101993474A
• 公開（公告）日: 2011-03-30
• 發明（設計）人: 李云森;陳子珺;程萍;雷啟福
• 申請（專利權）人: 上海金昊藥業開發有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/113;A61K31/122;A61K47/48;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司 31213
• 代理人: 王敏杰

1.一種具有環狀八肽結構的藍萼甲素衍生物，其特征在于，是一種貝殼杉烷型四環二萜類物質，具有貝殼杉烷型結構、羰基、羥基和環狀八肽結構，其分子結構的通式如下：

其中，R1、R2為-OH或

其中，R3為環狀八肽取代基。

2.如權利要求1所述的具有環狀八肽結構的藍萼甲素衍生物，其特征在于，所述R1和R2中有一個為-OH。

3.如權利要求1所述的多肽類藍萼甲素衍生物，其特征在于，所述R3為環狀八肽

所述環狀八肽的分子式為C33H48N11O17S2。

4.如權利要求3所述的具有環狀八肽結構的藍萼甲素衍生物，其特征在于，所述R3為D型環狀八肽取代基

所述R1為所述R2為-OH，其分子結構如下：

5.如權利要求3所述的具有環狀八肽結構的藍萼甲素衍生物，其特征在于，所述R3為D型環狀八肽取代基

所述R2為所述R1為-OH，其分子結構如下：

6.如權利要求3所述的具有環狀八肽結構的藍萼甲素衍生物，其特征在于，所述R3為L型環狀八肽取代基

所述R1為所述R2為-OH，其分子結構如下：

7.如權利要求3所述的具有環狀八肽結構的藍萼甲素衍生物，其特征在于，所述R3為L型環狀八肽取代基

所述R2為所述R1為-OH，其分子結構如下：

8.一種如權利要求1所述的具有環狀八肽結構的藍萼甲素衍生物的制備方法，其特征在于，包含以下步驟：

步驟1：提取

步驟1.1：取香茶菜藥材(地上部分)粉碎至20目～50目；

步驟1.2：將所得的粉碎物與95％乙醇(A.R.)按照體積比1∶5～1∶15混合，加熱，在80℃～90℃溫度條件下回流1～2小時，提取、過濾，得到提取液和剩余物；

步驟1.3：將步驟1.2所得的剩余物與95％乙醇(A.R.)按照體積比1∶5～1∶15混合，加熱，在80℃～90℃溫度條件下回流1～2小時，提取、過濾，得到提取液和剩余物，重復該步驟1～3次；

步驟1.4：合并步驟1.2和1.3所得的提取液；

步驟2：溶劑處理

步驟2.1：將步驟1所得的提取液加熱，在55℃～65℃溫度條件下加熱減壓濃縮，回收乙醇并得到粘稠的初級濃縮物；

步驟2.2：將步驟2.1所得的初級濃縮物與水按照體積比1∶8～1∶10混合，在室溫條件下以60～120轉/分的速度攪拌10分鐘，隨后靜置6～12小時，棄去上清液得到下層固體；

步驟2.3：將步驟2.2所得的固體與乙酸乙酯(A.R.)按照體積比1∶4～1∶6混合，在25℃～35℃溫度條件下以60～120轉/分的速度攪拌溶解，靜置1～3小時，過濾得到濾液和不溶物；

步驟2.4：將步驟2.3所得的不溶物與乙酸乙酯(A.R.)按照體積比1∶4～1∶6混合，在25℃～35℃溫度條件下以60～120轉/分的速度攪拌溶解，靜置1～3小時，過濾得到濾液和不溶物，重復該步驟1～3次；

步驟2.5：合并步驟2.3和2.4所得的濾液；

步驟2.6：將步驟2.5所得的濾液加熱，在35℃～45℃溫度條件下加熱減壓濃縮，回收乙酸乙酯(A.R.)，得到固體濃縮物；

步驟3：樹脂處理

步驟3.1：將步驟2所得的固體濃縮物與95％乙醇(A.R.)按照體積比1∶4～1∶6混合溶解，得到溶液；

步驟3.2：將步驟3.1所得的溶液緩慢加到7號樹脂柱中，起觀察樹脂的顏色，在樹脂柱有2/3變色時，停止加樣，并采用200ml～400ml的95％乙醇(A.R.)沖洗該樹脂柱，收集所有流出液，所述樹脂柱的填充物為強堿性陰離子樹脂并用氫氧化鈉飽和至pH值中性；

步驟3.3：將步驟3.2所得流出液加熱，并在55℃～65℃溫度條件下加熱減壓回流，直至溶劑干，得到固體殘留物；

步驟4：重結晶

步驟4.1：將上述殘留物與30℃～40℃的極性溶劑按照體積比1∶4～1∶6混合，得到初級溶液，加熱，在30℃～40℃溫度條件下減壓濃縮，在-23℃～-13℃溫度條件下靜置析晶，過濾得到淺黃色針狀結晶；

所述極性溶劑為按照體積比1∶1～1∶2混合的氯仿(A.R.)和丙酮(A.R.)的混合溶液；

步驟4.2：將步驟4.1所得的結晶與極性溶劑按照體積比1∶4～1∶6混合，在-23℃～-13℃溫度條件下反復重結晶2～4次，每次12～24小時，得到中間產物藍萼甲素；

所述極性溶劑為按照體積比1∶1～1∶4混合的氯仿(A.R.)和丙酮(A.R.)的混合溶液；

步驟5：衍生化

在室溫下，將步驟4所得將藍萼甲素溶于四氫呋喃(THF)中，隨后加入丁二酸和4-二甲氨基吡啶(DMAP)，攪拌反應，隨后減壓蒸去四氫呋喃，萃取得藍萼甲素的丁二酸酯，隨后將其在二氯乙烷(EDC)條件下與N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)反應得到作為中間產物的藍萼甲素的丁二酸酯與NHS的衍生物，隨后將其溶于THF溶液，并將環狀八肽溶于磷酸鹽緩沖溶液(PBS緩沖溶液)，隨后在室溫條件下，將藍萼甲素衍生物的THF溶液滴加到環狀八肽的PBS溶液中，攪拌反應，隨后減壓蒸餾除去THF，所得濾液經冷凍干燥后，得到具有環狀八肽結構的藍萼甲素衍生物。