[發(fā)明專利]一種HER2/NEU基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910056176.8
• 申請日: 2009-08-10
• 公開（公告）號: CN101993939A
• 公開（公告）日: 2011-03-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張云福;裘建英
• 申請（專利權(quán)）人: 芮屈生物技術(shù)(上海)有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海翼勝專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 31218
• 代理人: 翟羽

【技術(shù)領(lǐng)域】

本發(fā)明涉及一種試劑盒，具體地說關(guān)于一種HER2/NEU基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應(yīng)用

【背景技術(shù)】

乳腺癌是一種嚴(yán)重危害婦女健康的惡性腫瘤，近年來發(fā)病率穩(wěn)定上升且趨年輕化，發(fā)病率在女性腫瘤中居第三位。據(jù)世界范圍統(tǒng)計，全球每年約有120多萬人患乳腺癌，每年死于乳癌人數(shù)20萬，工業(yè)發(fā)達(dá)國家乳腺癌進(jìn)一步增加，根據(jù)美國癌癥協(xié)會(ACS)的報告，美國每年超過20萬人接受乳癌治療，其中約四萬人被奪去生命。從2006中國乳腺癌內(nèi)分泌治療高峰論壇上了解到，中國是乳腺癌發(fā)病率增長最快的國家之一，我國每年有約20萬名婦女患乳腺癌，中國乳腺癌發(fā)病率每年約增長3％；在京、津、滬等大中城市，乳腺癌已躍居女性惡性腫瘤之首。研究顯示，乳腺癌發(fā)病與家族遺傳有密切關(guān)系，特別是猶太人婦女有一種特殊的BRCA1基因變異與家族性乳癌密切相關(guān)，家族遺傳導(dǎo)致的乳癌大約占所有病例的5％-10，有乳癌家族史同時有BRCA1基因變異的婦女，她們一生中有85％機(jī)率患乳癌，而且有50％的機(jī)率患妊巢癌。同時發(fā)現(xiàn)，BRCA1基因無變異的大部分婦女患乳癌，各國乳癌的發(fā)病率都在升高。乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，據(jù)資料統(tǒng)計，發(fā)病率占全身各種惡性腫瘤的7-10％，在婦女僅次于子宮癌。它的發(fā)病常與遺傳有關(guān)，以及40-60歲之間，絕經(jīng)期前后的婦女發(fā)病率較高。僅約1-2％的乳腺患者是男性。通常發(fā)生在乳房腺上皮組織的惡性腫瘤。是一種嚴(yán)重影響婦女身心健康甚至危及生命的最常見的惡性腫瘤之一。

乳腺癌從癌前變到形成癌癥，需要幾年時間，如何做到早期檢測、診斷、預(yù)后的檢測及診治后的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移早期檢出是降低發(fā)病率和死亡率的關(guān)鍵。

HER2/neu是由癌基因ErbB2/neu編碼的具有酪氨酸蛋白激酶活性的跨膜糖蛋白，分子量為185ku，屬表皮生長因子受體(epidermal?growth?factorreceptor，EGFR)家族，具有自動磷酸化作用.乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌(nonsmall?celllung?cancer，NSCLC)等惡性腫瘤存在HER2/neu過表達(dá)，與腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移、血管形成及化療耐藥等有關(guān)。大量的研究文獻(xiàn)報道，在多數(shù)癌癥(卵巢癌、乳癌、肺癌、腎癌、結(jié)腸癌、胃癌等)，常有HER2/neu基因大量表達(dá)的現(xiàn)象。HER2/neu大量表現(xiàn)的癌癥常伴隨著較強(qiáng)的轉(zhuǎn)移能力、血管新生能力、抗藥性及較差治愈率等特性，因此HER2/neu成為癌癥診斷和治療上一個重要的標(biāo)的。特別是乳腺癌，約有15-40％的病人HER2/neu基因表達(dá)增高。

(隨著分子生物技術(shù)日益完善，功能基因組學(xué)，癌癥基因組學(xué)等研究的深入展開，至今，我們已有可能在基因水平上做更精確的早期診斷，在癌變前期或癌細(xì)胞形成(單克隆時)就能做到早期預(yù)測診斷。本發(fā)明采用核酸原位雜交技術(shù)檢測HER2/NEU基因，對乳癌的早期基因水平的預(yù)測有非常重要的臨床意義。HER2/NEU??序列號：NM-001005862，4816BP，17q21.1″，cds：521….4198bp。

本發(fā)明的原位雜交技術(shù)(in?situ?hybridization)是將分子生物學(xué)與細(xì)胞化學(xué)技術(shù)結(jié)合起來，以標(biāo)記的核酸分子為探針，在組織細(xì)胞原位檢測特異性核酸分子的技術(shù)。其原理是使含有特異序列、經(jīng)過標(biāo)記的核酸單鏈(即探針)，在適宜條件下與組織細(xì)胞中的互補(bǔ)核酸單鏈即靶核酸發(fā)生雜交，再以放射自顯影或免疫細(xì)胞化學(xué)方法對標(biāo)記探針進(jìn)行探測，從而在細(xì)胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。

【發(fā)明內(nèi)容】

本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種HER2/NEU基因的原位雜交檢測試劑盒的用途。

本發(fā)明的再一的目的是，提供一種HER2/NEU基因的原位雜交檢測試劑盒。

本發(fā)明的另一的目的是，提供一種HER2/NEU基因的原位雜交檢測方法。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：

一種HER2/NEU基因的原位雜交檢測試劑盒在制備檢測乳腺癌疾病藥物中的應(yīng)用，所述的試劑盒包括雜交探針、標(biāo)記物，所述的雜交探針序列如SEQ?ID?NO.1所示。

所述的雜交探針序列如SEQ?ID?NO.1所示的RNA序列。

所述的標(biāo)記物選自放射性核素或非放射性標(biāo)記物。

所述的放射性核素選自³H、³⁵S、¹²⁵I或³²P中的一種。

所述的非放射性標(biāo)記物選自生物素、地高辛、堿性磷酸酶、辣根過氧化酶或熒光素中的一種。