[發明專利]一種EGFR基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應用

無效

• 申請號: 200910056102.4
• 申請日: 2009-08-07
• 公開（公告）號: CN101988112A
• 公開（公告）日: 2011-03-23
• 發明（設計）人: 張云福;裘建英
• 申請（專利權）人: 芮屈生物技術(上海)有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海申蒙商標專利代理有限公司 31214
• 代理人: 周豐

【技術領域】

本發明涉及一種試劑盒，具體地說關于一種EGFR基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應用

【背景技術】

癌癥也叫惡性腫瘤，腫瘤是指機體在各種致瘤因素作用下，局部組織的細胞異常增生而形成的局部腫塊。癌癥病變的基本單位是癌細胞。人體細胞老化死亡后會有新生細胞取代它，以維持機體功能，人體絕大部分細胞都可以增生，但這種增生是有限度的，而癌細胞的增生則是無止境的，這使患者體內的營養物質被大量消耗。同時，癌細胞還能釋放出多種毒素，使人體產生一系列癥狀，晚期時它轉移到全身各處生長繁殖，最后導致人體消瘦、無力、貧血、食欲不振、發熱及臟器功能受損等，器官功能衰竭而死亡。

EGFR表皮生長因子受體，在生理狀態下是細胞生長的調節因子，與其配體如EGF、TGF-α結合后發揮其生理效應，可啟動細胞生長周期，即通過一系列細胞內傳遞體將生長信號傳導至核內引起細胞的生長反應，調節細胞的分裂、分化和增殖。在惡性腫瘤中，EGFR過度表達，持續向細胞內傳遞分裂增殖信號，干擾細胞分化的正常調控狀態，引起細胞持續增殖，發生惡性轉化。細胞系的實驗研究對成釉細胞瘤細胞表面的表皮生長因子受體(ECFR)和C-erbB-2等生長因子受體進行了檢測，發現腫瘤細胞表面的EGFR和C-erbB-2的陽性率分別為(42.20±3.42)％和(57.03±5.06)％。腫瘤生長和發展過程中，體內微環境對腫瘤細胞的分裂增殖具有重要意義，微環境和腫瘤細胞之間可通過自分泌、旁分泌和內分泌等方式產生的多種信號因子，單獨或聯合調控腫瘤細胞的增殖生長。C-erbB-2與EGFR的結構相似，已有實驗證明在肺癌和黑色素瘤患者中EGFR陽性細胞的轉移和繼發生長能力都強于EGFR陰性的細胞亞群。實驗中近半數的腫瘤細胞表面存在EGFR和C-erbB-2等生長因子受體，推測成釉細胞瘤本身分泌的生長因子和細胞表面的生長因子受體可能在腫瘤細胞體內增殖和侵襲等過程中起重要作用。有大量文獻報道EGFR基因各種癌癥發病有關，EGFR基因表達變化明顯增加。在肺癌、胰腺癌和結直腸癌等多種腫瘤患者的外周血中可以檢測到表皮生長因子受體(EGFR)的表達。肺癌和良性疾病之間外周血血清EGFR水平無差別，但在伴有淋巴結轉移的肺癌中的表達與無轉移組之間差別顯著，血清EGFR水平可作為肺癌淋巴結轉移的指標。

隨著分子生物技術日益完善，功能基因組學，癌癥基因組學等研究的深入展開，至今，我們已有可能在基因水平上做更精確的早期診斷，在癌變前期或癌細胞形成(單克隆時)就能做到基因水平的早期預測診斷。采用核酸原位雜交技術檢測Egfr基因的表達量，對臨床各種類型癌癥的早期基因水平的診斷有非常重要的臨床意義。EGFR基因序列號：NM_005228，5616bp，mRNA，7p12″CDS：247……3879bp。

本發明的原位雜交技術(in?situ?hybridization)是將分子生物學與細胞化學技術結合起來，以標記的核酸分子為探針，在組織細胞原位檢測特異性核酸分子的技術。其原理是使含有特異序列、經過標記的核酸單鏈(即探針)，在適宜條件下與組織細胞中的互補核酸單鏈即靶核酸發生雜交，再以放射自顯影或免疫細胞化學方法對標記探針進行探測，從而在細胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。

【發明內容】

本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種EGFR基因的原位雜交檢測試劑盒的用途。

本發明的再一的目的是，提供一種EGFR基因的原位雜交檢測試劑盒。

本發明的另一的目的是，提供一種EGFR基因的原位雜交檢測方法。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案是：

一種EGFR基因的原位雜交檢測試劑盒在制備檢測癌癥疾病藥物中的應用，所述的試劑盒包括雜交探針、標記物，所述的雜交探針序列如SEQ?ID?NO.1所示。

所述的疾病是腎癌，胰腺癌，結直腸癌或肺癌。

所述的雜交探針序列如SEQ?ID?NO.1所示的RNA序列。

所述的標記物選自放射性核素或非放射性標記物。

所述的放射性核素選自³H、³⁵S、¹²⁵I或³²P中的一種。

所述的非放射性標記物選自生物素、地高辛、堿性磷酸酶、辣根過氧化酶或熒光素中的一種。

所述的非放射性標記物優選自地高辛。

所述的試劑盒還包括增效劑，所述的增效劑是堿性磷酸酶抗體。

為實現上述第二個目的，本發明采取的技術方案是：