[發明專利]一種MAGEA3基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應用

無效

• 申請號: 200910056080.1
• 申請日: 2009-08-07
• 公開（公告）號: CN101988096A
• 公開（公告）日: 2011-03-23
• 發明（設計）人: 裘建英;張云福
• 申請（專利權）人: 芮屈生物技術(上海)有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海申蒙商標專利代理有限公司 31214
• 代理人: 周豐

【技術領域】

本發明涉及一種試劑盒，具體地說關于一種MAGEA3基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應用

【背景技術】

肝癌是我國常見惡性腫瘤之一，死亡率高，在惡性腫瘤死亡順位中僅次于胃、食道而居第三位；在部份地區的農村中則占第二位，僅次于胃癌。我國每年死于肝癌約11萬人，占全世界肝癌死亡人數的45％。起病常隱匿，多在肝病隨訪中或體檢普查中偶然發現肝癌。此時病人既無癥狀，體格檢查亦缺乏腫瘤本身的體征，此期稱之為亞臨床期。肝癌一旦出現癥狀，而來就診者其病程大多已進入中晚期。

肝癌從癌前變到形成癌癥，需要幾年時間，如何做到早期檢測、診斷、預后的檢測及診治后的復發、轉移早期檢出是降低發病率和死亡率的關鍵。

黑素瘤相關抗原(melanoma-associated?antiger，MAGE)是一類腫瘤特異性抗原，由位于X染色體的MAGE基因家庭編碼。在肝癌組織中，MAGE-1和MAGE-3基因呈特異性高表達，而在肝硬變和正常肝活檢組織中不表達，只有個別肝細胞癌癌旁組織標本可表達MAGE-3mRNA，提示這兩種的mRNA有可能作為特異性腫瘤標記物，用于檢測肝癌細胞血行播散。肝細胞癌患者術后外周血MAGE和(或)MAGE-3mRNA持續陽性或由陰性轉為陽性者預后差，監測隨訪外周血MAGE和(或)MAGE-3mRNA可早期預測轉移復發。但也有文獻報道，肝細胞癌患者肝癌組織中MAGE-4基因表達的陽性率與肝細胞癌患者TNM分期、腫瘤直徑、有無完整包膜、有無門靜脈癌栓、生存期等均無關。

隨著分子生物技術日益完善，功能基因組學，癌癥基因組學等研究的深入展開，至今，我們已有可能在基因水平上做更精確的早期診斷，在癌變前期或癌細胞形成(單克隆時)就能做到早期預測診斷。

原位雜交技術(in?situ?hybridization)是將分子生物學與細胞化學技術結合起來，以標記的核酸分子為探針，在組織細胞原位檢測特異性核酸分子的技術。其原理是使含有特異序列、經過標記的核酸單鏈(即探針)，在適宜條件下與組織細胞中的互補核酸單鏈即靶核酸發生雜交，再以放射自顯影或免疫細胞化學方法對標記探針進行探測，從而在細胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。

【發明內容】

本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種MAGEA3基因的原位雜交檢測試劑盒的用途。

本發明的再一的目的是，提供一種MAGEA3基因的原位雜交檢測試劑盒。

本發明的另一的目的是，提供一種MAGEA3基因的原位雜交檢測方法。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案是：

一種MAGEA3基因的原位雜交檢測試劑盒在制備檢測肝癌疾病藥物中的應用，所述的試劑盒包括雜交探針、標記物，所述的雜交探針序列如SEQ?IDNO.1所示。MAGEA3基因序列號：NM_0053621753bp，mRNA，染色體Xq28″，cds：210...1154bp。

所述的雜交探針序列如SEQ?ID?NO.1所示的RNA序列。

所述的標記物選自放射性核素或非放射性標記物。

所述的放射性核素選自³H、³⁵S、¹²⁵I或³²P中的一種。

所述的非放射性標記物選自生物素、地高辛、堿性磷酸酶、辣根過氧化酶或熒光素中的一種。

所述的非放射性標記物優選自地高辛。

所述的試劑盒還包括增效劑，所述的增效劑是堿性磷酸酶抗體。

為實現上述第二個目的，本發明采取的技術方案是：

一種MAGEA3基因的原位雜交檢測試劑盒，包括雜交探針、標記物，其中所述的雜交探針序列如SEQ?ID?NO.1所示，所述的標記物選自放射性核素或非放射性標記物。

為實現上述第三個目的，本發明采取的技術方案是：

一種MAGEA3基因的原位雜交檢測方法，該方法包括以下步驟：

a、將試劑盒中的雜交探針與底物中待測RNA接觸，形成雜交復合體；

b、檢測a步驟得到的雜交復合體。

所述的a步驟中形成雜交復合體的條件為：核酸雜交的溫度為42℃；核酸雜交的時間為16-24小時，所述的底物選用血液細胞標本或組織細胞標本。

本發明的診斷試劑盒的組份是由雜交探針，雜交液，顯色劑，增效劑等組成。本試劑盒的核酸雜交原理是分子生物學業內人士均熟知，具體操作步驟是標本處理、預雜交、雜交、免疫組化染色、鏡下進行定量分析、結果報告，其中雜交的具體步驟包括：

儀器操作：