[發明專利]一種DAXX基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應用

無效

• 申請號: 200910056063.8
• 申請日: 2009-08-07
• 公開（公告）號: CN101988090A
• 公開（公告）日: 2011-03-23
• 發明（設計）人: 裘建英;張云福
• 申請（專利權）人: 芮屈生物技術(上海)有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海申蒙商標專利代理有限公司 31214
• 代理人: 周豐

【技術領域】

本發明涉及一種試劑盒，具體地說關于一種DAXX基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應用

【背景技術】

急性淋巴細胞白血病(acute?lymphoblastic?leukemia，ALL)是一種起源于B系或T系淋巴祖細胞的腫瘤性疾病，原始細胞在骨髓異常增生和聚集并抑制正常造血，導致貧血、血小板減少和中性粒細胞減少；原始細胞也可侵及髓外組織，如腦膜、性腺、胸腺、肝、脾、或淋巴結等，引起相應病變。ALL最常見于兒童，但可以發生在任何年齡。

DAXX是死亡協同蛋白，是一種新型轉錄調控蛋白，屬DNA結合蛋白。Daxx與細胞的轉錄調控、生長發育、凋亡以及病毒感染等生理或病理過程密切相關。Daxx在不同的凋亡途徑中可能起不同的作用，但其在細胞凋亡中的具體作用機制尚不完全清楚。臨床研究者對83例ALL白血病患者Daxx?m?RNA表達水平進行了檢測，目的是觀察Daxx在急性白血病(ALL)中的表達及其與ALL的分型、臨床特征、療效及預后的關系。應用免疫組織化學方法檢測88例初治ALL骨髓細胞Daxx蛋白的表達情況，分析其與FAB分型、臨床特征、療效及預后的關系。結果急性髓細胞白血病(AML)骨髓細胞中Daxx的表達顯著高于正常對照組(P＜0.05)與急性淋巴細胞白血病(ALL)組(P＜0.05)。在AML亞型中，Daxx在M3中的表達顯著高于M1，M2，M3，M4和M5。采用逐步回歸法分析，校正其它參數，Daxx的表達與初診時的白細胞數及骨髓原始細胞數目呈正相關，與療效呈負相關。結論Daxx在急性髓細胞白血病中廣泛表達，其表達的紊亂可能在AML的發病中起作用，還與AML的某些臨床特征、療效及預后密切相關。另有臨床研究者對急性淋巴細胞白血病(ALL)患者Daxx基因的表達進行研究。采用半定量反轉錄-聚合酶鏈式反應(RT-PCR)技術檢測了83例ALL患者(初治41例，復發42例)及36名正常對照Daxx基因的表達。結果41例初治和42例復發患者Daxx?mRNA表達陽性率分別為75.61％及71.43％，均高于正常對照組36.11％(P＜0.01)。半定量分析結果示，ALL初治和復發組患者的Daxx?mRNA表達水平分別為0.43±0.029和0.38±0.025，也高于正常對照組0.27±0.04(P＜0.05)。結論Daxx基因在ALL患者中高表達。

隨著分子生物技術日益完善，功能基因組學，癌癥基因組學等研究的深入展開，至今，我們已有可能在基因水平上做更精確的早期診斷，在癌變前期或癌細胞形成(單克隆時)就能做到早期預測診斷。

原位雜交技術(in?situ?hybridization)是將分子生物學與細胞化學技術結合起來，以標記的核酸分子為探針，在組織細胞原位檢測特異性核酸分子的技術。其原理是使含有特異序列、經過標記的核酸單鏈(即探針)，在適宜條件下與組織細胞中的互補核酸單鏈即靶核酸發生雜交，再以放射自顯影或免疫細胞化學方法對標記探針進行探測，從而在細胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。

【發明內容】

本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種DAXX基因的原位雜交檢測試劑盒的用途。

本發明再一個目的是，提供一種DAXX基因的原位雜交檢測試劑盒。

本發明的另一的目的是，提供一種DAXX基因的原位雜交檢測方法。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案是：

一種DAXX基因的原位雜交檢測試劑盒在制備檢測急性淋巴細胞白血病藥物中的應用，所述的試劑盒包括雜交探針、標記物，所述的雜交探針序列如SEQ?ID?NO.1所示，序列號：NM-001141969?2632bp?CDS：208……2430bp，在染色體6p21.3”，。

所述的雜交探針序列如SEQ?ID?NO.1所示的RNA序列。

所述的標記物選自放射性核素或非放射性標記物。

所述的放射性核素選自³H、³⁵S、¹²⁵I或³²P中的一種。

所述的非放射性標記物選自生物素、地高辛、堿性磷酸酶、辣根過氧化酶或熒光素中的一種。

所述的非放射性標記物優選自地高辛。

所述的試劑盒還包括增效劑，所述的增效劑是堿性磷酸酶抗體。

為實現上述第二個目的，本發明采取的技術方案是：

一種DAXX基因的原位雜交檢測試劑盒，包括雜交探針、標記物，其中所述的雜交探針序列如SEQ?ID?NO.1所示，所述的標記物選自放射性核素或非放射性標記物。