[發明專利]一種SCC基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應用

無效

• 申請號: 200910056062.3
• 申請日: 2009-08-07
• 公開（公告）號: CN101988089A
• 公開（公告）日: 2011-03-23
• 發明（設計）人: 裘建英;張云福
• 申請（專利權）人: 芮屈生物技術(上海)有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海翼勝專利商標事務所(普通合伙) 31218
• 代理人: 翟羽

【技術領域】

本發明涉及一種試劑盒，具體地說關于一種SCC基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應用

【背景技術】

鱗癌，又稱表皮樣癌，是發生在皮膚、附屬器或粘膜的惡性腫瘤。鱗癌多發于50歲以上的男性，常見于面部、頭皮、下唇、手背、前臂、陰部等處。尤其是皮膚與粘膜交界處更易發生。初起為暗紅色堅硬的疣樣小結節，表面毛細血管擴張，中央有角質物附著，不易剝離，用力剝后可出血。皮損逐漸擴大，形成堅硬的紅色斑塊，表面有少許鱗屑，邊境清楚，向周圍浸潤，觸之較硬，迅速擴大形成潰瘍，潰瘍向周圍及深部侵犯，可深達肌肉與骨骼，損害互相粘連形成堅硬的腫塊，不易移動，潰瘍基底部為肉紅色，有壞死組織，有膿液、臭味，易出血。潰瘍邊緣隆起外翻，有明顯炎癥，自覺疼痛。如發生在皮膚與粘膜交界處，固潮濕與摩擦更易出血，發展更快，可形成菜花狀，破壞性大，有明顯疼痛，易轉移，預后不良。

腫瘤相關抗原TA-4是由KATO等于1977年，從子宮組織中提取的一種糖蛋白。鱗狀上皮細胞癌相關抗原(squamous?cell?carcinoma?asscociatedantigen，SCC)，是TA-4的提純成分，具有較強的抗原表達能力。這種抗原存在于正常組織(含量極微)和惡性病變的婦女生殖上皮細胞，以及不同器官鱗狀上皮癌患者的血清中。SCC?mRNA對子宮頸癌早期有較高的診斷價值，SCC基因表達量與腫瘤侵犯程度及是否轉移有關。SCC基因表達變化對子宮頸癌的術后和化療后的監測提供幫助，指導臨床醫師采取合理的治療方案，對復發與否有較好的提示價值。SCC?mRNA表達高與肺鱗癌相關，表達水平與癌癥進展程度密切相關。SCC?mRNA高表達與食道鱗癌也有關。

隨著分子生物技術日益完善，功能基因組學，癌癥基因組學等研究的深入展開，至今，我們已有可能在基因水平上做更精確的早期診斷，在癌變前期或癌細胞形成(單克隆時)就能做到早期預測診斷。

原位雜交技術(in?situ?hybri?dization)是將分子生物學與細胞化學技術結合起來，以標記的核酸分子為探針，在組織細胞原位檢測特異性核酸分子的技術。其原理是使含有特異序列、經過標記的核酸單鏈(即探針)，在適宜條件下與組織細胞中的互補核酸單鏈即靶核酸發生雜交，再以放射自顯影或免疫細胞化學方法對標記探針進行探測，從而在細胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。

【發明內容】

本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種SCC基因的原位雜交檢測試劑盒的用途。

本發明的再一的目的是，提供一種SCC基因的原位雜交檢測試劑盒。

本發明的另一的目的是，提供一種SCC基因的原位雜交檢測方法。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案是：

一種SCC基因的原位雜交檢測試劑盒在制備檢測子宮頸癌或肺鱗癌或食道鱗癌疾病藥物中的應用，所述的試劑盒包括雜交探針、標記物，所述的雜交探針序列如SEQ?ID?NO.1所示。SCC序列號：NM_006919，1793bp，mRNA，CDS145..1317bp。

所述的雜交探針序列如SEQ?ID?NO.1所示的RNA序列。

所述的標記物選自放射性核素或非放射性標記物。

所述的放射性核素選自³H、³⁵S、¹²⁵I或³²P中的一種。

所述的非放射性標記物選自生物素、地高辛、堿性磷酸酶、辣根過氧化酶或熒光素中的一種。

所述的非放射性標記物優選自地高辛。

所述的試劑盒還包括增效劑，所述的增效劑是堿性磷酸酶抗體。

為實現上述第二個目的，本發明采取的技術方案是：

一種SCC基因的原位雜交檢測試劑盒，包括雜交探針、標記物，其中所述的雜交探針序列如SEQ?ID?NO.1所示，所述的標記物選自放射性核素或非放射性標記物。

為實現上述第三個目的，本發明采取的技術方案是：

一種SCC基因的原位雜交檢測方法，該方法包括以下步驟：

a、將試劑盒中的雜交探針與底物中待測RNA接觸，形成雜交復合體；

b、檢測a步驟得到的雜交復合體。

所述的a步驟中形成雜交復合體的條件為：核酸雜交的溫度為42℃；核酸雜交的時間為16-24小時，所述的底物選用血液細胞標本或組織細胞標本。