[發明專利]麻瘋樹法呢基焦磷酸合酶蛋白編碼序列及其在植物中的應用

無效

• 申請號: 200910054817.6
• 申請日: 2009-07-15
• 公開（公告）號: CN101798579A
• 公開（公告）日: 2010-08-11
• 發明（設計）人: 林娟;侯嶸;周選圍
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C12N15/54
• 分類號: C12N15/54;C12N9/10;C12N15/63;C12N1/19;C12N5/10;C12N15/82;C07K16/40;C12Q1/68
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 吳桂琴

1.一種分離出的DNA分子，其特征在于，它包括：編碼具有麻瘋樹JcFPS蛋白質活性多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列與SEQ?ID?N0.1中從核苷酸第221-1246位的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度嚴緊條件下與SEQ?ID?NO.1中從核苷酸第221-1246位的核苷酸序列雜交。

2.如權利要求1所述的DNA分子，其特征在于，所述的序列編碼具有SEQID?NO.2所示的氨基酸序列的多肽。

3.如權利要求1所述的DNA分子，其特征在于，該序列具有SEQ?ID?NO.1中從核苷酸第221-1246位的核苷酸序列。

4.一種分離出的麻瘋樹JcFPS蛋白多肽，其特征在于，它包括：具有SEQIDNO.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變異多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。

5.如權利要求4所述的多肽，其特征在于，該多肽是具有SEQ?ID?NO.2序列的多肽。

6.一種載體，其特征在于，它包含權利要求1所述的DNA。

7.如權利要求6所述的載體，其特征在于：用于構建所述植物表達載體的出發載體為p3301-BI121、pBll21、pBin19、pCAMBIA2301、pCAMBIA1301或pCAMBIA1300。

8.一種權利要求6所述載體轉化的宿主細胞，其特征在于它是原核或真核細胞。

9.一種產生具有麻瘋樹JcFPS蛋白質活性的多肽的方法，特征在于其包括如下步驟：

(1)將編碼具有麻瘋樹JcFPS蛋白活性的多肽的純化的核苷酸序列可操作地連于表達調控序列，形成麻瘋樹JcFPS蛋白表達載體，所述的核苷酸序列與SEQID?NO.1中從核苷酸第221-1246位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(2)將步驟(1)中的表達載體轉入宿主細胞，形成麻瘋樹JcFPS蛋白的重組細胞；

(3)在適合表達麻瘋樹JcFPS蛋白多肽的條件下，培養步驟(2)中的重組細胞；

(4)分離出具有麻瘋樹JcFPS蛋白活性的基本純的多肽。

10.一種利用轉基因技術將編碼具有麻瘋樹JcFPS蛋白活性多肽的核苷酸序列轉化入植物以提高植物中萜類物質的方法，其特征在于，通過如下步驟：

(1)將編碼具有麻瘋樹JcFPS蛋白活性的多肽的純化的核苷酸序列可操作地連于植物表達調控序列，形成含麻瘋樹JcFPS蛋白的植物表達載體，所述的核苷酸序列與SEQ?ID?NO.1中從核苷酸第221-1246位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(2)將步驟(1)中的表達載體轉入植物宿主細胞；

(3)通過篩選如抗生素篩選，獲得轉化細胞并最終再生轉基因植株及其后代，包括植物種子及植物組織。

11.按權利要求10所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)的植物宿主為水稻、小麥、大豆、玉米、煙草、油菜、高粱、棉花、苜蓿、麻瘋樹或擬南芥。

12.一種與權利要求7所述的麻瘋樹JcFPS蛋白多肽多膚特異性結合的抗體，其特征在于，它包括多克隆抗體和單克隆抗體。

13.一種核酸分子，其特征在于，它包含權利要求1所述的DNA分子中8-100個連續核苷酸。

14.一種檢測樣品中麻瘋樹JcFPS核苷酸序列的方法，其特征在于，它包括下述步驟；用權利要求10所述探針與樣品進行雜交，然后檢測探針是否發生結合；所述的樣品是PCR擴增后的產物，其中PCR擴增引物對應于麻瘋樹JcFPS核苷酸編碼序列，并可位于該編碼序列的兩側或中間，引物長度為15-50個核苷酸。