[發明專利]NPTX2基因在制備抗腫瘤藥物中的應用無效

申請號：	200910054452.7	申請日：	2009-07-07
公開（公告）號：	CN101584868A	公開（公告）日：	2009-11-25
發明（設計）人：	李兆申;張玲;高軍	申請（專利權）人：	中國人民解放軍第二軍醫大學
主分類號：	A61K48/00	分類號：	A61K48/00;A61K38/17;A61P35/00;A61P1/18;G01N33/574
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摘要：
搜索關鍵詞：	nptx2 基因制備腫瘤藥物中的應用
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及生物醫學領域，具體涉及一種新的抑癌基因——NPTX2基因及其編碼的蛋白質在制備抗腫瘤藥物和腫瘤診斷試劑中的應用。

背景技術

惡性腫瘤，一類嚴重危害人類健康的疾病，其生成涉及多種基因和基因以外的變化，最常發生變化的兩類基因為癌基因與抑癌基因。2008年，科學家們通過研究發現眾多新的與癌癥發生發展相關的基因。美國弗吉尼亞聯邦大學科學家發現了一種稱為SARI的新抑癌基因，它能夠參與并抑制一種關鍵蛋白質，這種蛋白質在90％的人類癌癥中都過度表達(Su?ZZ(2008).Proc?Natl?Acad?Sci?USA.105：20906-20911)。Zender等人則在Cell雜志上報道了13種新抑癌基因，其中的大多數人們之前都沒有意識到它們和癌癥有關(Zender?L(2008).Cell.135：852-864)。不斷擴充的癌基因與抑癌基因新名單無疑給人們帶來希望的曙光。

神經元正五聚蛋白(Neuronal?pentraxin，NP，NPTX)有兩個亞型，NPI(NPTX1)和NP?II(NPTX2)。NPTX2分布較廣，在腦、肝臟、胰腺、心臟、骨骼肌和睪丸中均有表達。NPTX2基因位于人染色體7q21.3-q22.1(GENBANK?No.：NM_002523)，編碼431個氨基酸，NPTX2為一47.05kDa的蛋白，有一個信號肽序列和三個N糖基化位點，是一種可分泌蛋白(Hsu?YC(1995).Genomics.28：220-227；Schlimgen?AK(1995).Neuton.14：519-526)。

關于NPTX2的功能研究在神經系統及其相關疾病中研究相對較多。NPTX2基因在胰腺癌中的研究主要集中在表觀遺傳學方面，發現該基因啟動子CpG島甲基化參與其表達調控(Matsubayashi?H(2006).CancerRes.66：1208-1217；Sato?N(2008).Mod?Pathol.21：238-244；Park?JK(2007).Pancreas.35：e9-15；Parsi?ML(2008).Clin?Gastroenterol?Hepatol.6：1270-1278)。但尚無關于該基因為抑癌基因的報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種新的抑癌基因——NPTX2基因及其編碼的蛋白質在制備抗腫瘤藥物和腫瘤診斷試劑中的應用。

本發明利用分子克隆及體外實驗等方法，發現NPTX2基因在制備抗腫瘤藥物和腫瘤診斷試劑中的應用方面的新功能，并對其進行了如下研究：

1.利用實時定量PCR、細胞爬片等方法觀察到NPTX2基因在胰腺癌中處于低表達狀態，且其低表達至少部分原因是由于該基因啟動子的高甲基化參與了表達調控。

2.通過構建真核表達載體和流式分析瞬時轉染后人胰腺癌細胞株的細胞凋亡情況，發現轉染NPTX2基因全長cDNA后細胞凋亡增加。

3.利用上述構建好的真核表達載體和脂質體轉染的方法將含有該基因的真核表達質粒轉入人胰腺癌PANC-1細胞系中，通過G418篩選獲得穩定表達株。

4.進行了一系列體外實驗發現NPTX2基因過表達可抑制胰腺癌細胞的增殖、遷移和侵襲力。

以上實驗結果判定，NPTX2基因是一種潛在的抑癌基因，可為腫瘤的分子治療提供新的靶點，亦可與其他藥物、分子治療聯合應用，用于預防或治療胰腺癌，或用于制備腫瘤診斷試劑。

本發明提供了NPTX2基因及其編碼的蛋白質在制備抗腫瘤藥物和腫瘤診斷試劑中的應用。

上述的腫瘤是胰腺癌。

附圖說明

圖1是實時定量PCR方法檢測NPTX2基因在胰腺癌組織和癌旁正常胰腺組織中的相對表達量。