[發(fā)明專利]一種在培養(yǎng)基中添加半乳糖以提高林可霉素產(chǎn)量的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910053594.1
• 申請日: 2009-06-23
• 公開（公告）號: CN101684482A
• 公開（公告）日: 2010-03-31
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 葉蕊芳;周曉芳;儲成亮;張銳;朱義彬;張宏周
• 申請（專利權(quán)）人: 華東理工大學(xué);河南天方藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號: C12P19/64
• 分類號: C12P19/64;C12R1/565
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司
• 代理人: 繆利明

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種在培養(yǎng)基中添加半乳糖以提高林可霉素產(chǎn)量的方法。

背景技術(shù)

林可霉素(Lincomycin，簡稱LCM)又稱潔霉素，對革蘭氏陽性菌有很好的抑制作用，它沒有交叉耐藥性而且本身的毒性較低，所以被廣泛應(yīng)用于由革蘭氏陽性菌引起的疾病，同時，對革蘭氏陰性菌亦有一定的抑制作用。林可霉素及其下游半合成產(chǎn)品稱為林可酰胺類抗生素，林可酰胺類抗生素已成為臨床應(yīng)用上主要的抗生素之一。

一般所說的林可霉素是指其A組份，它是由古柯葉液堿PHA(反式-N-甲基-4-正丙基脯氨酸(PPL)和甲硫林可酰胺MTL(6-氨基-6，8-二脫氧-1-硫代-0-赤式-2-D-半乳糖吡喃糖苷)兩部分通過肽鍵連接而成的抗生素。如圖1所示，林可霉素A的生物合成途徑分為兩個分枝，兩個分枝分別生成丙基脯氨酸(PPL)和甲硫林可胺(MTL)。

國外研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵過程中直接添加作為前體的丙基脯氨酸可以提高林可霉素A的產(chǎn)量而相應(yīng)減少林可霉素B的產(chǎn)量，但添加半乳糖(甲硫林可胺的結(jié)構(gòu)類似物)是否會提高林可霉素A的產(chǎn)量則尚未有相關(guān)報道。

發(fā)明內(nèi)容

本申請的發(fā)明人在研究提高林可霉素產(chǎn)量的過程中發(fā)現(xiàn)，向林可霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基中加入適量的半乳糖，能提高林可霉素的產(chǎn)量。

因此，本發(fā)明的目的在于，提供一種提高林可霉素產(chǎn)量的方法，該方法通過向林可霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基中加入適量的半乳糖來實現(xiàn)。

根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例，使用的林可霉素產(chǎn)生菌為林肯鏈霉菌(Streptomyces?lincolnensis)，保藏號為CCTCC?M?208064。

根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例，半乳糖加入的量為培養(yǎng)基重量的0.01～0.1％，更優(yōu)選的為0.05～0.1％；

根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例，加入的時間為在培養(yǎng)基中加入林肯鏈霉菌0～144小時，更優(yōu)選的加入時間為在培養(yǎng)基中加入林肯鏈霉菌48～120小時。

使用本發(fā)明提供的方法，通過在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加適量的在林可霉素合成中不作為前體物質(zhì)的半乳糖，可明顯提高林可霉素的產(chǎn)量。

附圖說明

圖1是林可霉素A的生物合成途徑。

具體實施方式

以下結(jié)合具體實施例，對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。應(yīng)理解，以下實施例僅用于說明本發(fā)明而非用于限定本發(fā)明的范圍。

在本發(fā)明的下述實施例中，使用的林肯鏈霉菌(Streptomyces?lincolnensis)已于2008年04月25日提交位于武漢大學(xué)的中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏號為CCTCC?M?208064。

在本發(fā)明的實施例中，除特別說明外，所使用的比例均為重量百分比。

在本發(fā)明的實施例中，發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為：0.8％(NH₄)₂SO₄，0.8％NaNO₃，0.5％NaCl，0.02％K₂HPO₄，3％黃豆餅粉，0.2％玉米漿，0.8％CaCO₃，5％葡萄糖，pH7.0。

在本發(fā)明的實施例中，林可霉素的效價采用杯碟法進(jìn)行檢測，中國藥典2005版(二部)。

實施例1、不同濃度半乳糖對林可霉素生物合成的影響

向林可霉素發(fā)酵培養(yǎng)基中分別加入不同濃度的半乳糖，同時以不添加半乳糖的培養(yǎng)基作為對照，接入林肯鏈霉菌(Streptomyces?lincolnensis)發(fā)酵培養(yǎng)168小時后，取樣測定林可霉素的效價，結(jié)果如表1所示。

表1、不同濃度半乳糖對林可霉素生物合成