[發明專利]一種異黃酮苷類化合物及其制備方法

有效

• 申請號: 200910052850.5
• 申請日: 2009-06-10
• 公開（公告）號: CN101921300A
• 公開（公告）日: 2010-12-22
• 發明（設計）人: 殷瑜;楊志鈞;夏興;劉效穩;阮麗軍;李秋爽;金文翔;楊天;魏維;戈梅;羅敏玉;陳代杰
• 申請（專利權）人: 上海來益生物藥物研究開發中心有限責任公司;浙江醫藥股份有限公司新昌制藥廠
• 主分類號: C07H17/07
• 分類號: C07H17/07;C12P19/60;A61K31/7048;A61P31/04;C12R1/04
• 代理公司: 上海德昭知識產權代理有限公司 31204
• 代理人: 肖劍南

技術領域

本發明屬于生物化學領域，具體而言，涉及一種異黃酮苷類化合物及其制備方法。

背景技術

自從發現并使用青霉素后，人類對抗微生物感染獲得了重大突破，但隨著抗生素的不斷使用，細菌、真菌等微生物的抗藥性也不斷提高，這對臨床抗感染治療構成持續的挑戰。

因此，尋找新的抗生素或具有抑菌/殺菌作用的化合物成為一個重要的研究課題，也具有同樣的緊迫性，尤其是在抗真菌藥物方面更是如此。

發明內容

本發明涉及的化合物，其來自于東方擬無枝酸菌ATCC?43491的發酵液，為發酵液中一種含量較低的組分，通過分離純化，經質譜(MS)、核磁共振氫譜(¹H?NMR)、核磁共振碳譜(¹³C?NMR)檢測，進行結構分析，確定該組分為一種新的化合物。

因此，本發明的首要目的在于，提供一種新的化合物。

本發明提供的化合物，如結構式(I)所示：

本發明的另一個目的在于，提供如結構式(I)所示的化合物的制備方法。

本發明提供的化合物通過發酵培養東方擬無枝酸菌獲得。

根據本發明，使用的東方擬無枝酸菌為東方擬無枝酸菌ATCC?43491。

根據本發明，該化合物的制備方法還包括以下步驟：

A)東方擬無枝酸菌發酵液離心，收集離心上清；

B)對步驟A獲得的離心上清，使用HPD100樹脂進行初純，收集洗脫液；

C)對步驟B中獲得的洗脫液使用中壓液相色譜精純，收集洗脫液。

根據本發明，HPD100樹脂初純包括以下步驟：將離心上清液上樣到HPD100樹脂柱上，用乙醇-水溶液梯度洗脫，收集乙醇體積百分比在25％到35％區段的洗脫液。

根據本發明，中壓液相色譜精純包括以下步驟：將步驟B中獲得的洗脫液上樣到反相C-18柱；使用體積比為35∶65的甲醇-水溶液1洗滌；使用體積比為44∶56的甲醇-水溶液2洗脫，收集洗脫液，獲得本發明提供的化合物溶液，其中，在上樣至C-18柱步驟前，對步驟B中獲得的洗脫液進行濃縮，甲醇-水溶液2的pH為3.8。

本發明提供了結構式(I)所示的新的化合物，該化合物對白色念珠菌具有很好的抑制作用，可用于開發抗菌藥物。

附圖說明

圖1是東方擬無枝酸菌發酵離心上清的HPLC檢測圖譜，其中，峰1為化合物LYV09lx01的峰。

圖2是中壓液相色譜精純后獲得的洗脫后溶液的HPLC檢測圖譜。

圖3是化合物LYV09lx01的質譜檢測結果。

圖4是化合物LYV09lx01的核磁共振氫譜的檢測結果。

圖5是化合物LYV09lx01的核磁共振碳譜的檢測結果。

圖6是化合物LYV09lx01的結構式。

具體實施方式

以下結合具體實施例，對本發明作進一步說明。應理解，以下實施例僅用于說明本發明而非用于限定本發明的范圍。

在本發明的下述實施例中，使用的培養基組成如下：

斜面培養基：高氏1號瓊脂培養基。

種子培養基：可溶性淀粉40g/L，去脂黃豆粉20g/L，甘油20g/L，葡萄糖15g/L，KNO₃6g/L，KH₂PO₄0.2g/L，MgCl₂·6H₂O?0.4g/L。

發酵培養基：乳糖20g/L，黃豆粉15g/L，氯化鈉3g/L，硫酸鎂1g/L，磷酸氫二鉀1g/L。

在本發明的下述實施例中，HPD100樹脂初純條件如下：

取發酵液離心上清液上HPD100樹脂柱，以乙醇-水溶液進行梯度洗脫，收集乙醇體積百分比在25％-35％區段的洗脫液，濃縮得LYV09lx01粗品溶液。

中壓液相色譜純化條件如下：

色譜柱為反相C-18柱。樣品上柱后先用甲醇∶水＝35∶65(體積比)溶液洗滌除雜，然后用甲醇∶水(體積比)＝44∶56的溶液(磷酸調pH至3.8)洗脫，收集洗脫液，以HPLC檢測洗脫液中產物。

HPLC條件如下：

流動相配制：用0.2％的三乙胺溶液，磷酸調pH至3.2作為緩沖液。緩沖液與乙睛和四氫呋喃按92∶7∶1的比例混合，搖勻，作為A液；緩沖溶液與乙睛和四氫呋喃按70∶29∶1的比例混合，搖勻，作為B液。超聲波脫氣20min，備用。

色譜柱：Diamonsil^TM?C18，0DS，ID?4.6*200mm

柱溫：40℃