[發(fā)明專利]一種檢測胰腺癌血清標志物的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910052696.1
• 申請日: 2009-06-09
• 公開（公告）號: CN101613748A
• 公開（公告）日: 2009-12-30
• 發(fā)明（設計）人: 李兆申;孔祥毓;荊清;杜奕奇;王國坤;高軍;林寒
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 上海德昭知識產(chǎn)權代理有限公司
• 代理人: 丁振英

技術領域

本發(fā)明涉及醫(yī)學分子生物學技術領域，是一種檢測胰腺癌血清標志物的方法，該胰腺癌血清標志物具體為microRNA-196a。

背景技術

microRNA最早發(fā)現(xiàn)于1993年，是一種小的、非編碼蛋白質的單鏈RNA，由18～25個核苷酸組成。microRNA通過與mRNA3’非翻譯區(qū)(3’UTR)結合，使得靶mRNA降解或抑制其翻譯，實現(xiàn)其生物學功能。經(jīng)過20多年艱苦卓絕的努力，科學家對microRNA研究取得了突破性進展，發(fā)現(xiàn)其在動物、植物和病毒中普遍存在，且在許多生命活動中起著非常重要的作用。根據(jù)最新的microRNA數(shù)據(jù)庫統(tǒng)計(miRBase?Registry?13.0)，人體已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了706種microRNA。microRNA具有高度的保守性、時序性和組織特異性。

近來研究表明，某些microRNA在細胞的分化發(fā)育中起著重要的作用，提示其與腫瘤的發(fā)生密切相關。通過特定的分子生物學技術(包括：Northern印記雜交、實時定量PCR，上調或下調特定microRNA的表達等)，人們發(fā)現(xiàn)microRNA表達量的變化與很多腫瘤密切相關，如：肺癌、乳腺癌、肝癌、結腸癌、白血病等。功能學研究顯示：microRNA可能與癌基因或抑癌基因起著同樣的作用。超過50％的microRNA基因位于腫瘤相關的基因組區(qū)域或者不穩(wěn)定區(qū)域，這種現(xiàn)象提示，microRNA在部分腫瘤的發(fā)生過程中起著重要的作用。

盡管科學家們對于血液中DNA的研究已經(jīng)有很長的歷史，但對血液中RNA的研究仍處在初始階段。由于循環(huán)血中RNA酶含量豐富，因此在其中檢測到的RNA片段常被當做大片段RNA的降解片段。進來，多篇相關文獻驗證了循環(huán)血中miRNA的穩(wěn)定存在，并探討了循環(huán)血中microRNA對于疾病診斷及預后研究的巨大意義。(Chen?X，Ba?Y，Ma?L，Cai?X，et?al.Cell?Res.2008Oct；18(10)：997-1006.Mitchell?PS，Parkin?RK，Kroh?EM，et?al.Proc?Natl?Acad?Sci?U?S?A.2008Jul29；105(30)：10513-8.Gilad?S，Meiri?E，Yogev?Y，et?al.PLoS?ONE.2008Sep5；3(9)：e3148.)

microRNA-196a(miRNA-196a)是一種進化上非常保守的microRNA(LaDeana?W.Hillier，Webb?Miller，Ewan?Birney，et?al.Nature.2004Dec9；432(7018)：695-716.)，在很多物種中廣泛的存在(人類、小鼠、大鼠、蟾蜍、斑馬魚等)。有研究表明，miR-196a在細胞的分化發(fā)育中起著重要的作用，(QiuR，Liu?Y，Wu?JY，et?al.Brain?Res?Bull.2009Apr?6；79(1)：26-31.Mansfield?JH，HarfeBD，Nissen?R，et?al.Nat?Genet.2004Oct；36(10)：1079-83.)已有研究證實：microRNA196a表達異常與許多腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關，例如：miR-196a可以抑制ANXA1(一種腫瘤抑制蛋白，可以誘導凋亡，抑制細胞的增殖和遷移)的表達，從而促進食道癌，乳腺癌等的發(fā)生。(Luthra?R，Singh?RR，Luthra?MG，et?al.Oncogene.2008Nov?6；27(52)：6667-78.)SNP研究也表明：hsa-mir-196a與非小細胞肺癌的生存期密切相關。(Tian?T，Shu?Y，Chen?J，et?al.Cancer?Epidemiol?BiomarkersPrev.2009Apr；18(4)：1183-7.Hu?Z，Chen?J，Tian?T，et?al.J?Clin?Invest.2008Jul；118(7)：2600-8.)2008年，Charles等首先在彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)患者的血清中檢測到microRNA-196a(miR-196a)，并證實其在DLBCL中的表達水平顯著高于正常人，且與患者無復發(fā)生存期的長短密切相關。

胰腺癌惡性程度高，早期診斷困難，缺乏確實有效的方法，預后極差。手術切除是唯一可以延長生存期的治療手段。不幸的是，絕大多數(shù)胰腺癌患者診斷時已屬晚期(TNM分期III、IV期)，失去了手術機會。如果能尋找到胰腺癌特異的血清標志物，對胰腺癌的早期診斷和治療方案的確定將具有極大的臨床應用價值。

發(fā)明內(nèi)容