[發(fā)明專利]一種結(jié)核分枝桿菌MPT64抗原的模擬表位肽及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910052489.6
• 申請(qǐng)日: 2009-06-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101565454A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-10-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊華;張麗婷;胡忠義;劉忠華;秦蓮花;蔡江麗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海市肺科醫(yī)院
• 主分類號(hào): C07K7/06
• 分類號(hào): C07K7/06;G01N33/543
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 陸 飛;盛志范

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種能模擬結(jié)核分枝桿菌MPT64抗原的表位肽， 以及該表位肽在結(jié)核病血清學(xué)檢測(cè)中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

結(jié)核病是WHO重點(diǎn)控制的傳染性疾病，目前仍是嚴(yán)重危害人民健康的公共衛(wèi)生問(wèn)題。 據(jù)有關(guān)資料統(tǒng)計(jì)，全球約有1/3的人口感染結(jié)核菌，現(xiàn)有結(jié)核病人約2000萬(wàn)，每年新發(fā) 病800萬(wàn)～1000萬(wàn)人，每年約有200萬(wàn)人死于結(jié)核病，是其它所有傳染病死亡人數(shù)的總和。 我國(guó)的結(jié)核病疫情極其嚴(yán)峻，現(xiàn)有結(jié)核感染者5億，占全球的1/4，每年有13萬(wàn)人死于結(jié) 核病，為其它各類傳染病和寄生蟲(chóng)病死亡人數(shù)總和的2倍。

目前結(jié)核病控制存在的最主要問(wèn)題是病人發(fā)現(xiàn)率低，治愈率低。在診斷方面，現(xiàn)有的 檢查方法均存在著一定的局限性，難以達(dá)到快速、準(zhǔn)確的結(jié)核病診斷。因此，加大結(jié)核分 枝桿菌的基礎(chǔ)研究，尋找快速、靈敏、簡(jiǎn)便、實(shí)用的結(jié)核病診斷新方法，提高結(jié)核病人的 檢出率，是目前結(jié)核病研究需要迫切解決的問(wèn)題。

血清學(xué)檢查是目前結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室三大診斷方法之一，相對(duì)細(xì)菌學(xué)和分子生物學(xué)檢查具 有多種優(yōu)點(diǎn)，其方法簡(jiǎn)單、快速，價(jià)格便宜，不需要特殊的大型檢測(cè)設(shè)備，即使基層醫(yī)院 也能夠廣泛開(kāi)展，對(duì)痰涂片陰性的肺結(jié)核，肺外結(jié)核和不易獲得痰標(biāo)本的兒童結(jié)核的診斷 均具有重要價(jià)值，成為了早期發(fā)現(xiàn)與診斷結(jié)核病的理想選擇，但是常規(guī)血清學(xué)檢查仍存在 著敏感性、特異性較低的缺點(diǎn)，限制了臨床應(yīng)用，主要原因是難以得到高敏感性、高特異 性的抗原。

MPT64是結(jié)核分枝桿菌中重要的保護(hù)性抗原，編碼這種蛋白的基因只存在于MTB毒株 中而卡介苗中缺失。研究發(fā)現(xiàn)MPT64免疫小鼠可引起體液免疫和保護(hù)性細(xì)胞免疫，并可 有效抵抗MTB感染，因此MPT64蛋白作為檢測(cè)抗原可有效區(qū)分卡介苗接種者與結(jié)核感染 者，是結(jié)核病血清學(xué)診斷的理想抗原。然而完整蛋白的血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果并不理想，敏感性、 特異性不能滿足臨床應(yīng)用要求。(見(jiàn)實(shí)施方案2結(jié)果)

噬菌體展示隨機(jī)肽庫(kù)技術(shù)是將外源多肽展示于噬菌體顆粒表面的方法，是一種高效分 子進(jìn)化研究的高通量篩選體系，在免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和藥物開(kāi)發(fā)等多個(gè)領(lǐng)域中得到了非 常廣泛的應(yīng)用。目前，隨機(jī)肽庫(kù)技術(shù)已作為一種非常有效的技術(shù)廣泛用于各種分子(包括 蛋白、多糖、糖脂等)的抗原模擬表位的研究中，在以特異的抗體為靶分子，經(jīng)過(guò)多輪噬 菌體篩選后，可獲得各種特異性強(qiáng)、親和力高的模擬特定抗原表位結(jié)構(gòu)和化學(xué)特征的多肽序 列。應(yīng)用噬菌體展示技術(shù)篩選獲得的抗原模擬表位多肽分子作為半抗原不僅可以特異地識(shí) 別并結(jié)合相應(yīng)抗體，從而發(fā)現(xiàn)患者血清中的抗體，而且這些模擬多肽可以通過(guò)基因合成的 方法大量生產(chǎn)，為抗體的特異性檢測(cè)提供快速、靈敏、簡(jiǎn)便、實(shí)用的新方法。

噬菌體展示隨機(jī)肽庫(kù)技術(shù)在結(jié)核抗原模擬表位方面的應(yīng)用也已有報(bào)道，Barenholz等在 應(yīng)用噬菌體展示隨機(jī)肽庫(kù)技術(shù)篩選結(jié)核菌糖脂抗原脂阿拉伯糖甘露聚糖模擬短肽的實(shí)驗(yàn) 中證實(shí)，在血清學(xué)檢測(cè)中該噬菌體展示短肽具有較好的敏感性和特異性，Gevorkian等研 究發(fā)現(xiàn)，抗原決定簇是致免疫應(yīng)答的決定部位，可作為免疫診斷中抗原的替代品。但應(yīng)用 噬菌體展示隨機(jī)肽庫(kù)技術(shù)篩選結(jié)核分枝桿MPT64抗原模擬表位的研究目前國(guó)內(nèi)、外尚未見(jiàn) 報(bào)道(根據(jù)維普、PubMed等中、英文數(shù)據(jù)庫(kù)檢索)。

發(fā)明內(nèi)容

根據(jù)上述技術(shù)領(lǐng)域的研究進(jìn)展，本發(fā)明提供一種能模擬結(jié)核分枝桿MPT64抗原表位的 短肽，還公開(kāi)了該短肽在結(jié)核病血清學(xué)檢測(cè)中的應(yīng)用。

一種結(jié)核分枝桿菌MPT64抗原的模擬表位肽，其氨基酸序列通式為：X₁DSMLX₂X₃， 其中D代表天冬氨酸，S代表絲氨酸，M代表甲硫氨酸，L代表亮氨酸，X₁～X₃代表任意 氨基酸。

上述結(jié)核分枝桿菌MPT64抗原的模擬表位肽，優(yōu)選后特征在于X₁為S，X₂為L(zhǎng)或S， X₃為W代表的色氨酸。

上述結(jié)核分枝桿菌MPT64抗原模擬表位肽在結(jié)核病血清學(xué)檢測(cè)中作為檢測(cè)試劑的應(yīng) 用。