[發明專利]用于快速高效分離純化巰基蛋白酶的納米復合親和膜的制備

無效

• 申請號: 200910052433.0
• 申請日: 2009-06-03
• 公開（公告）號: CN101564656A
• 公開（公告）日: 2009-10-28
• 發明（設計）人: 朱利民;張海濤;劉軍芳;曹旻君;聶華麗
• 申請（專利權）人: 東華大學
• 主分類號: B01D71/40
• 分類號: B01D71/40;C12N9/50
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所
• 代理人: 黃志達;謝文凱

1.用于快速高效分離純化巰基蛋白酶的納米復合親和膜的制備，包括：

(1)將體積比為9～12∶1的六氟異丙醇HFIP和甲酸混合液作為溶劑體系，混摻入反應容器內，溫度為40～60℃，水浴振蕩反應20～45min；

(2)將尼龍6和殼聚糖粉末在攪拌條件下緩慢加入上述反應容器內，繼續攪拌2～3h至完全溶脹，其中尼龍6顆粒質量濃度為5～8wt％，殼聚糖的質量濃度為0～2wt％；

(3)將上述反應容器置于水浴振蕩器內，在回流冷凝下，緩慢加熱至40～60℃，振蕩15h～30h至完全溶解，得尼龍6/殼聚糖紡絲液；

(4)用注射器抽取尼龍6/殼聚糖紡絲液，固定在靜電紡絲裝置上，調節紡絲參數進行電紡，靜電壓為10～18kv；接收屏采用鋁箔接地接收，針頭與接收屏的距離為10～20cm，得尼龍6/殼聚糖超細納米纖維膜，然后干燥；

(5)將干燥后的尼龍6/殼聚糖納米纖維膜切成圓形膜片，放入50～60℃，濃度為10～15wt％的NaOH溶液中活化20-30min；

(6)將上述纖維膜，用熱水洗數次后，放入到染料溶液中反應；

(7)用20～30wt％的NaCl溶液在40℃～80℃水浴振蕩處理20～45min，使染料吸附到尼龍6/殼聚糖納米纖維膜上；

(8)調節水浴溫度，用25～30wt％Na₂CO₃在60℃～90℃水浴振蕩反應3～6h；

(9)冷卻，洗滌，或保存于Tris-HCl緩沖液，得到以染料為配基的尼龍6/殼聚糖納米纖維親和膜。

2.根據權利要求1所述的用于快速高效分離純化巰基蛋白酶的納米復合親和膜的制備，其特征在于：所述步驟(1)六氟異丙醇HIFP的質量濃度為99％～100％，含水量小于0.1％。

3.根據權利要求1所述的用于快速高效分離純化巰基蛋白酶的納米復合親和膜的制備，其特征在于：所述步驟(4)中的注射器規格為5ml，針頭內徑約為0.4～0.7mm；噴出流速為0.5～2ml/h。

4.根據權利要求1所述的用于快速高效分離純化巰基蛋白酶的納米復合親和膜的制備，其特征在于：所述步驟(4)中的干燥方法是先將紡出的膜室溫下干燥12h，然后放入烘箱中90℃干燥4～6h，最后放入真空干燥器中60～70℃干燥24h。

5.根據權利要求1所述的用于快速高效分離純化巰基蛋白酶的納米復合親和膜的制備，其特征在于：所述步驟(5)圓形膜片的直徑為47mm。

6.根據權利要求1所述的用于快速高效分離純化巰基蛋白酶的納米復合親和膜的制備，其特征在于：所述步驟(6)染料為染料Cibacron?Blue?F3GA，濃度為5～15mg/ml。

7.根據權利要求1所述的用于快速高效分離純化巰基蛋白酶的納米復合親和膜的制備，其特征在于：所述步驟(9)中的洗滌是用40～50℃熱水、含量為99.5～100％的甲醇、2～3M?NaCl、3～6M尿素洗滌，洗滌程度是所洗后的洗滌液為無色。

8.根據權利要求1所述的用于快速高效分離純化巰基蛋白酶的納米復合親和膜的制備，其特征在于：所述的納米復合親和膜應用于巰基蛋白酶的分離純化。