[發明專利]細粒棘球絳蟲EgFABP-Eg95多肽及其重組枯草芽孢疫苗的制備與應用

有效

• 申請號: 200910051515.3
• 申請日: 2009-05-19
• 公開（公告）號: CN101555483A
• 公開（公告）日: 2009-10-14
• 發明（設計）人: 胡旭初;武偉華;王立英;伍衛平
• 申請（專利權）人: 中山大學;中國疾病預防控制中心寄生蟲病預防控制所
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C07K19/00;C07K16/18;C12N1/00;C12N1/21;A61K39/00;A61P33/00;A23K1/16;C12R1/125
• 代理公司: 上海光華專利事務所
• 代理人: 許亦琳;余明偉

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，具體涉及細粒棘球絳蟲EgFABP-Eg95多肽及其重組枯草芽孢疫苗的制備與應用。

背景技術

益生菌(probiotics)屬于微生態范疇，動物腸道內正常菌群中有益的微生物菌種經培養、發酵、干燥、加工等特殊工藝制成含有活菌或活菌制劑(Minocha?A.Probiotics?forpreventive?health.Nutr?Clin?Pract.2009，24(2)：227-41)。這些微生態制劑能夠去除或抑制腸道病原菌，維持腸道微生態平衡，調節宿主免疫機能，還合成和提供維生素、有機酸和多種酶類，降解飼料，達到防病、促生長、提高產量和品質。目前用于飼料中添加劑的菌種主要是芽孢桿菌類、乳酸菌類、酵母菌類三大類。其中枯草芽孢桿菌是美國FDA批準可用于食品和飼料工業的41種益生菌之一，是一種可用作飼料添加劑的需氧的非致病菌(Ducle?H，et?al，Characterization?of?Bacillus?probiotics?available?for?human?use.ApplEnviron?Microbiol.2004，70(4)：2161-71)。

枯草芽孢桿菌在貯藏過程中都以內生孢子的形式存在，不消耗飼料養分，可保持飼料的品質。芽孢桿菌抗逆性強，具有耐高溫、耐酸堿、耐擠壓等特點，可耐受顆粒飼料加工的影響。進入腸道后，在腸道上部迅速復活，復活率接近100％。它能使空腸內的pH值下降，氨濃度降低，并消耗大量的氧，維持腸道厭氧環境，抑制病菌的生長，維持腸道正常生態平衡，并有平衡和穩定乳酸菌的作用。它能產生活性很高的蛋白、淀粉、脂肪以及多種氨基酸。由于上述特點，芽孢桿菌是所有菌種中最理想的微生物添加劑(Hong?HA，et?al，The?safetyof?Bacillus?subtilis?and?Bacillus?indicus?as?food?probiotics.J?Appl?Microbiol.2008Aug；105(2)：510-20)。近年來，我國從法、德、美等國家進口的益生菌種主要是芽孢桿菌。

枯草芽孢桿菌還可作為理想的疫苗遞送系統(Ferreira?LC，et?al，Bacillus?subtilis?asa?tool?for?vaccine?development：from?antigen?factories?to?delivery?vectors.FerreiraRC，Schumann?W.An?Acad?Bras?Cienc.2005，77(1)：113-24)?？莶菅挎邨U菌由于其強大的表達和分泌能力以及對人畜的高安全性，被許多研究者作為外源蛋白，尤其是藥物蛋白的表達系統(Lovett?PS，Schoner?RG.Expression?plasmid?for?B.subtilis.Gene?Amplif?Anal.983；3：117-34.)。用敲除了細胞膜和細胞壁上的蛋白酶枯草芽孢桿菌突變株WB600作為表達系統，大大提高了對外源蛋白的表達分泌能力。該系統成功地高效表達了鏈激酶和人β-干擾素-1(Wong?SL，Ye?R，Nathoo?S.Engineering?and?production?of?streptokinase?in?aBacillus?subtilis?expression-secretion?system.Appl?Environ?Microbiol.1994Feb；60(2)：517-23.)。