[發明專利]一種固相化SUMO化系統及固相化去SUMO化系統

有效

• 申請號: 200910051004.1
• 申請日: 2009-05-12
• 公開（公告）號: CN101886068A
• 公開（公告）日: 2010-11-17
• 發明（設計）人: 楊淑偉;程夏楷
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海生命科學研究院
• 主分類號: C12N11/18
• 分類號: C12N11/18;C12N11/06;C12N11/12;C12Q1/48;C07K19/00;C07K1/10;C12P21/06
• 代理公司: 上海德昭知識產權代理有限公司 31204
• 代理人: 肖劍南

1.一種固相化SUMO化系統，其特征在于，所述固相化SUMO化系統為：

固相化的SUMO激活酶SAEI，SUMO激活酶SAEII或SUMO轉移酶Ubc9的SUMO化系統；或

固相化SUMO激活酶SAEI和SUMO激活酶SAEII的SUMO化系統；

其中，所述SUMO化系統包括SUMO激活酶SAEI，SUMO激活酶SAEII或SUMO轉移酶Ubc9。

2.如權利要求1所述的固相化SUMO化系統，其特征在于，所述SUMO激活酶SAEI的序列選自：

(a)SEQ?ID?NO：1；或

(b)在(a)限定的氨基酸序列中經過取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸且具有SUMO激活酶SAEI活性的由(a)衍生的蛋白質或多肽。

3.如權利要求1所述的固相化SUMO化系統，其特征在于，所述SUMO激活酶SAEII的序列選自：

(i)SEQ?ID?NO：2；或

(ii)在(i)限定的氨基酸序列中經過取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸且具有SUMO激活酶SAEII活性的由(i)衍生的蛋白質或多肽。

4.如權利要求1所述的固相化SUMO化系統，其特征在于，所述SUMO轉移酶Ubc9的序列選自：

(I)SEQ?ID?NO：3；或

(II)在(I)限定的氨基酸序列中經過取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸且具有SUMO轉移酶Ubc9活性的由(I)衍生的蛋白質或多肽。

5.如權利要求1所述的固相化SUMO化系統，其特征在于，所述SUMO激活酶SAEI，SUMO激活酶SAEII和SUMO轉移酶Ubc9的固相化為通過親和標簽的連接將所述SUMO激活酶SAEI，SUMO激活酶SAEII和SUMO轉移酶Ubc9吸附在與親和標簽有親和結合作用的介質上。

6.如權利要求5所述的固相化SUMO化系統，其特征在于，所述親和標簽選自但不僅限于以下標簽：Chitin?binding?domain(ChBD)，AviTag，Glutathione-S-Transferase(GST)，His6hexapeptide，calmodulin?binding?protein(CBP)，protein?C?tag，hemagglutinin(HA)tag，a?FLAG?tag和Myc?tag。

7.如權利要求5所述的固相化SUMO化系統，其特征在于，所述SUMO激活酶SAEI，SUMO激活酶SAEII和SUMO轉移酶Ubc9的固相化為通過ChBD序列的連接將所述SUMO激活酶SAEI，SUMO激活酶SAEII和SUMO轉移酶Ubc9吸附在二乙氨乙基纖維素上。

8.如權利要求7所述的固相化SUMO化系統，其特征在于，所述ChBD序列選自：

(1)SEQ?ID?NO：4；或

(2)在(1)限定的氨基酸序列中經過取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸且具有SUMO水解酶活性的由(1)衍生的蛋白質或多肽。

9.如權利要求7所述的固相化SUMO化系統的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

A)分別制備蛋白pChBD-SAEI，pChBD-SAEII和pChBD-SUMO轉移酶Ubc9；

B)將步驟A中制備好的pChBD-SAEI，pChBD-SAEII和pChBD-SUMO轉移酶Ubc9分別與二乙氨乙基纖維素充分混合，或將步驟A中制備好的pChBD-SAEI，pChBD-SAEII和pChBD-SUMO轉移酶Ubc9分別兩兩混合，再與二乙氨乙基纖維素充分混合，或將步驟A中制備好的pChBD-SAEI，pChBD-SAEII和pChBD-SUMO轉移酶Ubc9與二乙氨乙基纖維素共同充分混合，以獲得固相化的SUMO激活酶SAEI，SUMO激活酶SAEII和SUMO轉移酶Ubc9。

10.如權利要求9所述的方法，其特征在于，在步驟B后還包括高鹽洗脫以去除雜蛋白的步驟。

11.如權利要求1或5所述的固相化SUMO化系統的應用，其特征在于，所述應用為用于高通量鑒定可SUMO化蛋白，或用于將可SUMO化蛋白SUMO化以用于研究所述蛋白的功能。