[發明專利]一種纖維堆囊菌生產埃坡霉素B的發酵方法及發酵培養基

有效

• 申請號: 200910048789.7
• 申請日: 2009-04-03
• 公開（公告）號: CN101851591A
• 公開（公告）日: 2010-10-06
• 發明（設計）人: 陳少欣;田剛
• 申請（專利權）人: 上海醫藥工業研究院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P17/18;C12R1/01
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 薛琦;朱水平

技術領域

本發明涉及一種纖維堆囊菌生產埃坡霉素B的發酵方法及發酵培養基。

背景技術

埃坡霉素B作為粘細菌纖維堆囊菌的次級代謝產物，是一種微管超穩定的新型抗腫瘤活性物質。埃坡霉素B的作用機制與紫杉醇相同，但其在抗腫瘤譜、抗腫瘤活性、安全性、水溶性及合成方法等方面均優于紫杉醇，是一類前景廣闊的新型抗腫瘤藥物。

為了進行埃坡霉素的大規模生產，生物發酵是理想的途徑。埃坡霉素B一般由粘細菌纖維堆囊菌Sorangium?cellulosum?90發酵生產。專利WO93/10121中報道，在含碳源、氮源和無機鹽的介質中培養纖維堆囊菌的菌株，并在培養過程中加入吸附性樹脂，可生產得到低產量的埃坡霉素B。文獻《纖維堆囊菌的代謝產物及其生物學活性分析》(李越中，微生物學報，2001，41(6))，文獻《粘細菌纖維堆囊菌降解纖維素多酶復合體的確證和性質分析》(侯配斌，博士畢業論文，山東大學)，以及文獻《Mutation?and?ahigh-throughput?screening?method?for?improving?the?production?of?Epothilonesof?Sorangium》(Guo-li?Gong，J.Ind.Microbiol.Biotechnol.2007，34：615-623)均報道，使用M26培養基發酵粘細菌纖維堆囊菌，也可獲得低產量的埃坡霉素B。

盡管使用M26培養基發酵粘細菌纖維堆囊菌可以生產埃坡霉素B，但產量較低；若采用誘變篩選，又由于粘細菌纖維堆囊菌難以培養，誘變篩選難度又很大。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供了一種纖維堆囊菌發酵培養基，其用于發酵培養纖維堆囊菌制備埃坡霉素B時，菌株性能穩定，生長快速，產品埃坡霉素B的產量明顯提高。本發明還提供了一種纖維堆囊菌生產埃坡霉素B的發酵方法。

本發明提供了一種纖維堆囊菌發酵培養基，其包括碳源、氮源、無機鹽、大孔吸附樹脂和水，還包括氨基酸。

其中，所述的氨基酸較佳的選自賴氨酸、蘇氨酸和甲硫氨酸。

其中，所述的氨基酸的含量較佳的為0.1-500mg/L，更佳的為1-10mg/L。

其中，所述的纖維堆囊菌發酵培養基的pH值較佳的為3-9，更佳的為5-8。

其中，所述的纖維堆囊菌較佳的為Sorangium?cellulosum?90。

其中，所述的碳源為本領域常規使用的碳源，較佳的為0.2-2wt％的土豆淀粉或玉米淀粉或麥芽糊精或土豆糊精，以及0.1-1wt％的葡萄糖。

其中，所述的氮源為本領域常規使用的氮源，較佳的為0.05-0.5wt％的大豆蛋白胨或胰胨，以及0.1-1wt％的酵母膏。

其中，所述的無機鹽為本領域常規使用的無機鹽，較佳的為0.05-0.5wt％的MgSO₄·7H₂O，0.05-0.5wt％的CaCl₂·2H₂O，以及0.5-5ml/L的微量元素液。所述的微量元素液為本領域常規使用的微量元素液，較佳的參考Reichenbach?H.，Dworkin?M.等人的《The?Myxobacteria.The?Prokaryote》(2nded.1992.3418-3487)中相關內容配制，標準微量元素液(1L體系)：MnCl₂·4H₂O?100mg，CoCl₂?20mg，CuSO₄?10mg，Na₂MoO₄·2H₂O?10mg，ZnCl₂?20mg，LiCl?5mg，SnCl₂·2H₂O?5mg，H₃BO₃?10mg，KBr?20mg，KI?20mg，EDTANa-Fe³⁺8g。

其中，所述的大孔吸附樹脂較佳的為非極性大孔吸附樹脂，鑒于其用于發酵，為使之不易破碎，考慮其機械強度，更佳的選擇使用XAD-16大孔吸附樹脂。

其中，所述的大孔吸附樹脂的用量較佳的為體積百分比2％。

其中，所述的水較佳的為去離子水；所述水的用量較佳的為補足質量百分比100％。