[發(fā)明專利]一種自發(fā)淋巴高轉(zhuǎn)移性人卵巢癌細胞系

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910048461.5
• 申請日: 2009-03-27
• 公開（公告）號: CN101845418A
• 公開（公告）日: 2010-09-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 康玉;徐從劍;羅建明;程明軍;黃以萍;叢青;武欣;張曉燕;吳志勇;黃宇婷;張雯碧;王宜生
• 申請（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院
• 主分類號: C12N5/08
• 分類號: C12N5/08;C12Q1/18;C12R1/91
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 吳桂琴

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬生物技術(shù)、微生物動物細胞系領(lǐng)域，具體涉及一種自發(fā)淋巴高轉(zhuǎn)移性人卵巢癌細胞系及其建立方法和用途。

背景技術(shù)

研究報道，卵巢癌死亡率位居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤首位，高復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率和化療耐藥成為影響預(yù)后的兩大特點。淋巴轉(zhuǎn)移是卵巢癌早期播散的主要途徑，是引起卵巢癌術(shù)后復(fù)發(fā)、影響預(yù)后的重要因素。因卵巢癌死亡的患者中有48％～70％發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(Pereira?A，Magrina?JF，Rey?V，et?al.Pelvic?and?aortic?lymph?nodemetastasis?in?epithelial?ovarian?cancer.Gynecol?Oncol.2007；105：604-608.)。在進展期的患者中腹膜后淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移率為55％～75％(Di?Re?F，Baiocchi?G.Value?of?lymph?node?assessmentin?ovarian?cancer：Status?of?the?art?at?the?end?of?the?secondmillennium.Int?J?Gynecol?Cancer.2000；10：435-442.)。腹膜后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與患者生存率相關(guān)，有報道(吳小華，張志毅.卵巢癌腹膜后淋巴結(jié)切除術(shù)：生存預(yù)后因素分析.現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展.1996；5：133-136.)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者的死亡風(fēng)險是無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的2.75倍。因此，有必要加強對卵巢癌細胞淋巴轉(zhuǎn)移機制的研究，而建立可靠的淋巴高轉(zhuǎn)移細胞系和動物模型則是當務(wù)之急。

在人卵巢癌細胞系中，可用于小鼠移植瘤模型轉(zhuǎn)移研究的細胞系包括SKOV-3、CAOV-3、CAOV-4、OVCAR-3、AO、3AO及HO-8910等。由這些細胞株所建立的裸鼠皮下移植瘤和腹腔轉(zhuǎn)移瘤模型均少見淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生。其中AO、CAOV-3、CAOV-4和OVCAR-3有相對較高的轉(zhuǎn)移率，但研究顯示主要是出現(xiàn)在肺轉(zhuǎn)移(60％-90％)(高慶蕾，孟力，王世宣，et?al.卵巢癌高頻轉(zhuǎn)移細胞模型的建立及其與nm23-H1的相關(guān)性研究.現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展.2003；12：161-163.)。而許沈華等(許沈華，錢麗娟，牟瀚舟，et?al.高轉(zhuǎn)移人卵巢癌細胞系HO-8910PM的建立及其生物學(xué)特性.中華病理學(xué)雜志.1998；27：451-452.)從HO-8910中建立的卵巢癌高轉(zhuǎn)移株HO-8910PM也是通過肺轉(zhuǎn)移灶建立的。臨床實踐顯示，卵巢癌很少發(fā)生肺轉(zhuǎn)移，研究者認為，從肺轉(zhuǎn)移灶中尋找的高轉(zhuǎn)移株似不能完全反應(yīng)臨床真實情況。另有學(xué)者從低轉(zhuǎn)移潛能的卵巢癌細胞株SKOV-3從分離出淋巴定向轉(zhuǎn)移細胞株SKOV3-pm3，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率可達到100％(阮和云，黎丹戎，李力，et?al.卵巢癌淋巴結(jié)定向轉(zhuǎn)移裸鼠動物模型的建立.現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展.2007；16：338-340.)。但是，所建立的卵巢癌轉(zhuǎn)移模型是采用細胞在裸鼠足墊注射，從局部引流淋巴結(jié)內(nèi)篩選到定向到淋巴結(jié)的高轉(zhuǎn)移細胞株。該模型只有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，沒有腹腔轉(zhuǎn)移和腹水，與患者臨床病情轉(zhuǎn)歸有所不同。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種自發(fā)淋巴高轉(zhuǎn)移性人卵巢癌細胞系-SKOV-3/LN403。本發(fā)明的進一步目的是提供該淋巴高轉(zhuǎn)移性人卵巢癌細胞系的醫(yī)用用途。

本發(fā)明以人卵巢癌細胞系SKOV-3(美國典型培養(yǎng)物保藏中心ATCC編號：HTB-77，由一位64歲女性卵巢腺癌患者的腹水中分離而得)為親本細胞，通過多次BALB/c裸小鼠腹腔注射、腹膜后淋巴結(jié)連續(xù)篩選、體外擴增和傳代等策略，分離得到了具有自發(fā)性淋巴高轉(zhuǎn)移潛能的人卵巢癌細胞系SKOV-3/LN403。已于2009年3月27日保藏，保藏單位：CGMCC，北京市朝陽區(qū)大屯路，保藏編號：CGMCC?No.2940，分類命名：人卵巢癌細胞系參照的細胞株為SKOV-3/LN403，該細胞株具有明顯的淋巴高轉(zhuǎn)移性。

本發(fā)明細胞系具有以下生物學(xué)特性：

1)SKOV-3/LN403與其親本腫瘤細胞SKOV-3相比細胞形態(tài)類似，均為不規(guī)則形，但多呈集落生長；

2)SKOV-3/LN403在體外的細胞生長、增殖能力和侵襲能力均高于其親本細胞；

3)接種BALB/c裸小鼠后患鼠的生存期顯著縮短，淋巴轉(zhuǎn)移率由親本腫瘤細胞SKOV-3的10％(n＝10)上升為90％(n＝10)。

本發(fā)明的細胞系SKOV-3/LN403具有以下特點：

1.所建立的動物模型接近于卵巢癌患者的臨床實際情況：能廣泛腹腔內(nèi)轉(zhuǎn)移；血性腹水；淋巴轉(zhuǎn)移率高達90％，累及腹膜后淋巴結(jié)。