[發明專利]新型特異性多肽及其在制備診斷和防治冠狀病毒引起的嚴重急性呼吸綜合征藥物中的應用

有效

• 申請號: 200910047892.X
• 申請日: 2009-03-20
• 公開（公告）號: CN101575361A
• 公開（公告）日: 2009-11-11
• 發明（設計）人: 威廉·坎貝爾;賈偉國;黃冬
• 申請（專利權）人: 北京健諾威生物科技有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K7/08;A61K38/08;A61K38/10;A61K39/215;A61P31/14;A61P11/00;G01N33/53;C12R1/93
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司
• 代理人: 王敏杰

1.新型特異性多肽，其特征在于它是通過測試病人血清而得到的，該多肽序列是 VRGGDGKMKELS，蛋白名稱為N核衣殼蛋白，其氨基酸序列為：Val?Arg?Gly?Gly?Asp?Gly?Lys? Met?Lys?Glu?Leu?Ser。

2.根據權利要求1所述新型特異性多肽，其特征在于它通過如下方法獲得：

(1)構建SARS多肽陣列芯片：

SARS全基因組編碼的15ORFs蛋白質序列，通過軟件系統設計和自動化設備，按 序列漂移原則直接在纖維素膜上原位合成多肽氨基酸序列，并將這些重疊蛋白多肽片段 以24×18的密度排列在芯片上，即重疊多肽陣列技術；帶一級氨基的PEG改性纖維素 膜也購自德國Intavis公司；每次氨基酸點樣后，至少與經HOBT和DIPC化學活化的0.5 M氨基保護劑fmoc反應15分鐘；在20％氫化吡啶的二甲基甲酰胺溶液去保護基團后， 依次用二甲基甲酰胺溶液、甲醇清洗，風干，再開始下一次的偶合反應；經過12次原位 反應后，用含有5mL三氟乙酸、5mL二氯甲烷、300μL三異丙基硅烷和200μL水的溶 液去除側鏈保護基團；然后，多肽陣列芯片用二氯甲烷和甲醇清洗；風干后，多肽陣列 膜于-20℃儲存在密封袋中待用；

(2)病人血清和正常人血清采集；

(3)SARS冠狀病毒特征性多肽序列鑒定：

A、急性期SARS病人血清與多肽陣列芯片反應后，優選出共有17個區域：

質量排序 免疫球蛋白 基因組區域 多肽序列 結構蛋白 概率 1 IgM *4728，4729 VRGGDGKMKELS N 70％ 2 IgA *2588，2589 SQNPLAELKCSV S 20％ 3 IgM 4855，4856 DNVILLNKHIDA N 30％ 4 IgG 4383，4384 IQQLPETYFTQS ORF1b 20％ 5 IgG 4993，4994 ASFRLFARTRSM M 40％ 6 IgM 3563，3564 YSDVETPHLMGW ORF1b 40％ 7 IgM 3442，3443，3444 SRLSFKELLVYAAD ORF1b 80％ 8 IgM 5593，5594，5595 NWVTGGIAIAMACI M 50％ 9 IgA *1048，1049，1050 GLKTIATHGIAAIN ORF1a 50％ 10 IgG 3426，3427 KIFVDGVPFVVS ORF1b 50％ 11 IgG 5639，5640 KEITVATSRTLS M 40％ 12 IgG 1230，1231，1232 NPTDQSSYIVDSVA ORF1a 40％ 13 IgG 173，174 GTENLVIEGPTT ORF1a 30％ 14 IgG 2211，2212 MRFFTLRSITAQ ORF3 40％ 15 IgG 571，572，573 QVCVQTVRTQVYIA ORF1a 60％ 16 IgG 3875，3876 YYPSARIVYTAC ORF1b 40％ 17 IgG 1612，1613 ADVLYQPPQTSI ORF1a 20％

備注*表示該序列在恢復期病人血清也被鑒別出；

B、采用恢復期SARS病人血清與多肽陣列芯片反應后，鑒別出29個高質量的序列并按 總體質量排序

備注*表示該序列在急性期病人血清也被鑒別出；

(4)新型特異性多肽的獲得：

第一序號4728，4729區域對應SARS核衣殼蛋白的VRGGDGKMKELS序列被IgM識別 且質量最高，該序列的IgM異型與早期生成的抗體相一致；在恢復期，40％的病人對該 區域多肽序列顯示較強的陽性反應概率，表明該多肽片段是非常特征性的SARS指征。

3.根據權利要求1或2所述的新型特異性多肽，其特征在于：使得該多肽片段區域單獨 或和其他序列成為關鍵部分用于構建疾病診斷試劑盒。