[發(fā)明專利]一種卵巢腫瘤血清標(biāo)志物

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910047255.2
• 申請(qǐng)日: 2009-03-09
• 公開（公告）號(hào): CN101832977A
• 公開（公告）日: 2010-09-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐叢劍;路鑫;許國(guó)旺;曹銳;張曉燕;陳靜;房國(guó)良;康玉;何以豐;程明軍;萬小平;吳曉華;趙素敏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/72
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 吳桂琴

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種卵巢腫瘤血清標(biāo)志物。

背景技術(shù)

研究揭示，卵巢癌為婦科三大惡性腫瘤之一，死亡率居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的首位。目前臨床對(duì)于卵巢癌的早期診斷仍面臨諸多困難，一般體檢和影像學(xué)檢查作用有限，待能夠發(fā)現(xiàn)和明確診斷時(shí)，往往已到了中、晚期，缺少預(yù)警價(jià)值。常用于檢查的血清標(biāo)志物如：癌抗原125(CA125)對(duì)于惡性卵巢腫瘤有提示作用，但仍容易與炎癥、良性腫瘤導(dǎo)致的改變相混淆，因而易造成誤診(準(zhǔn)確性70％-80％)。為了滿足臨床診斷日益提高的靈敏度和特異性要求，開發(fā)新的血清腫瘤標(biāo)志物勢(shì)在必行。

研究顯示，惡性腫瘤發(fā)生必然伴隨一系列基因結(jié)構(gòu)的改變，引起細(xì)胞代謝方式轉(zhuǎn)換。如：由有氧呼吸為主改變?yōu)闊o氧酵解方式；由定向生長(zhǎng)變?yōu)闊o向繁殖，并分泌酶類降解基質(zhì)侵入周圍；還大量分泌原先不/弱表達(dá)的多肽，如CA125、p185等。這種代謝變化在早期即可被檢測(cè)出，如：在絨癌早期，可以測(cè)出血清中高糖化人絨毛膜促性腺激素beta單位的核心成分beta-hCG?core。故尋找到這些部位、組織特異性的血清生物標(biāo)志物臨床意義顯得尤為重要。

卵巢腫瘤血清標(biāo)志物的研究一直是本領(lǐng)域的研究重點(diǎn)。血清中蛋白含量較多，其譜型變化其中是由代謝改變所致結(jié)果，如：分泌、合成(同一型的轉(zhuǎn)換)、肽鏈切割點(diǎn)改變，修飾基團(tuán)變化等；或是導(dǎo)致代謝改變的原因，如：環(huán)氧化酶1(COX-1)和環(huán)氧化酶2(COX-2)轉(zhuǎn)換。

實(shí)踐顯示，代謝組學(xué)分析的對(duì)象物理化學(xué)參數(shù)差異大，采用單一分離分析手段難以對(duì)其進(jìn)行無偏向全面分析。在代謝組學(xué)的研究中，常采用色譜、質(zhì)譜、核磁共振(NMR)、紅外光譜、庫侖分析、紫外吸收、熒光散射、發(fā)射性檢測(cè)、光散射等分離分析手段及其組合。其中，色譜以其高分離度、高通量，質(zhì)譜以其普適性、高靈敏度和特異性，核磁共振技術(shù)特別是H-NMR以其對(duì)含氫代謝產(chǎn)物的普適性而成為最主要的分析工具；由于液一質(zhì)聯(lián)用和氣-質(zhì)聯(lián)用分析范圍較廣，成為代謝組學(xué)研究分析中很重要的工具。核磁共振技術(shù)具備快速和無偏向性的特點(diǎn)，但與其它技術(shù)相比靈敏度太低；其它方法，如CE/LIF技術(shù)有很高的檢測(cè)靈敏度，但為選擇性檢測(cè)，故色譜質(zhì)譜聯(lián)用是目前常采用的能較好兼顧靈敏度和無偏性的檢測(cè)方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種卵巢腫瘤血清標(biāo)志物。

根據(jù)本發(fā)明，可建立系列的良性、交界性和惡性卵巢腫瘤的血清代謝組學(xué)指紋圖譜。進(jìn)一步建立系列的良性、交界性和惡性卵巢腫瘤的血清代謝組學(xué)指紋模型。

本發(fā)明采用色譜和質(zhì)譜技術(shù)，高通量、大規(guī)模對(duì)患者血清進(jìn)行多層次的分析，篩選血清差異表達(dá)分子，通過對(duì)卵巢腫瘤患者血清進(jìn)行不同層次的代謝組學(xué)以及多肽譜分析，明確其中的小分子代謝譜，從而找到多組與良性、交界性和惡性卵巢腫瘤相關(guān)的特征性生物標(biāo)志物。本發(fā)明有可能為大規(guī)模篩查不同階段的卵巢腫瘤提供簡(jiǎn)易的方法，亦可為相關(guān)臨床病人的鑒別診斷提供有價(jià)值的參考依據(jù)。

本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案和方法實(shí)現(xiàn)，

(1)、收集各種類型的卵巢腫瘤患者的血清標(biāo)本；

首先制定標(biāo)本收集規(guī)程和配套管理、教育軟件。

包括，記錄病人基本信息：腫瘤分期、分型和分級(jí)，治療方式，化療和用藥類型、劑量、時(shí)間等，以便歸類分層。并對(duì)病人進(jìn)行跟蹤隨訪，為預(yù)后分析做好準(zhǔn)備。同時(shí)收集正常人群(女性)等量外周血標(biāo)本，以及卵巢良性腫瘤(內(nèi)異癥、囊腺瘤、畸胎瘤等)標(biāo)本。所有患者信息均輸入數(shù)據(jù)庫，加密保存并備份。

(2)、質(zhì)譜-色譜聯(lián)用的代謝組學(xué)方法完成標(biāo)本差異表達(dá)分子的篩選；

將收集到的標(biāo)本妥善保存(-70℃)，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)進(jìn)行處理。對(duì)不合格的標(biāo)本(數(shù)量不夠或混有雜質(zhì))，重新收集。標(biāo)本內(nèi)容物的提取、層析均按標(biāo)準(zhǔn)化過程進(jìn)行。所收集到的正常對(duì)照，良性及惡性腫瘤患者的血清進(jìn)行平行的代謝組學(xué)和蛋白組學(xué)分析：

①、基于UPLC-Q/TOF?MS(超高效液相色譜/飛行時(shí)間質(zhì)譜)的血液全組分代謝組學(xué)分析。將一定量的血清經(jīng)過除蛋白，凍干等前處理之后，進(jìn)行UPLC-Q/TOF?MS分析，得到患者的全血的代謝物譜圖，然后經(jīng)過代謝組學(xué)軟件的處理，得到各種代謝物的相關(guān)信息，所有數(shù)據(jù)歸一化之后，進(jìn)行下一步的多維數(shù)據(jù)綜合分析。