[發(fā)明專利]一種含11型腺病毒纖毛蛋白基因的增殖型重組溶瘤腺病毒、其構(gòu)建方法及其用途

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910045514.8
• 申請(qǐng)日: 2009-01-19
• 公開（公告）號(hào): CN101781636A
• 公開（公告）日: 2010-07-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 錢其軍;蘇長(zhǎng)青;李琳芳;吳紅平;吳孟超
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)東方肝膽外科醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N7/01
• 分類號(hào): C12N7/01;C12N15/861;A61K48/00;A61P35/00;C12R1/93
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1.一種增殖型重組溶瘤腺病毒，其特征在于該重組腺病毒含B亞群11型腺病毒纖毛頭的氨基酸編碼序列；并且該病毒基因組至少一個(gè)病毒增殖必需基因被突變或者被缺失而失去功能，或所述病毒在增殖必需基因序列的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)與翻譯起始位點(diǎn)ATG之間可操作地插入順式作用元件，所述元件控制基因組中至少一個(gè)病毒增殖必需基因的轉(zhuǎn)錄。

2.權(quán)利要求1的增殖型重組溶瘤腺病毒，其特征在于該重組腺病毒纖毛頭的氨基酸序列為人類B亞群11型腺病毒纖毛頭的氨基酸序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的增殖型重組溶瘤腺病毒，其特征在于所述病毒在增殖必需基因序列的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)與翻譯起始位點(diǎn)ATG之間可操作地插入的是腫瘤特異性啟動(dòng)子的順式作用元件。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的增殖型重組溶瘤腺病毒，其特征在于所述腫瘤特異性啟動(dòng)子選自：

(a)癌胚抗原啟動(dòng)子、增強(qiáng)子及其突變體序列；

(b)甲胎蛋白啟動(dòng)子、增強(qiáng)子及其突變體序列；

(c)人表皮生長(zhǎng)因子受體家族的受體酪氨酸激酶啟動(dòng)子、增強(qiáng)子及其突變體序列；

(d)乳腺癌相關(guān)抗原DF3/MUC1啟動(dòng)子、增強(qiáng)子及其突變體序列；

(e)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體KDR的啟動(dòng)子、增強(qiáng)子及其突變體序列；

(f)L-plastin啟動(dòng)子、增強(qiáng)子及其突變體序列；

(g)凋亡抑制蛋白家族成員的啟動(dòng)子、增強(qiáng)子及其突變體序列；

(h)前列腺素特異性抗原的啟動(dòng)子、增強(qiáng)子及其突變體序列；

(i)缺氧誘導(dǎo)因子-1調(diào)控的缺氧反應(yīng)元件保守序列；

(j)轉(zhuǎn)錄因子E2F啟動(dòng)子、增強(qiáng)子及其突變體序列；和

(k)人端粒酶亞基啟動(dòng)子、增強(qiáng)子及其突變體序列

中的至少一種。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的增殖型重組溶瘤腺病毒，其特征在于所述病毒增殖必需基因是野生型的或者經(jīng)過突變的編碼E1a、E1b-55kDa、E1b-19kDa、E2或E4的基因。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的增殖型重組溶瘤腺病毒，其特征在于所述病毒增殖必需基因是經(jīng)過點(diǎn)突變、插入突變、插入終止密碼子、完全或部分缺失而失活的E1b-55kDa或E1b-19kDa基因。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的增殖型重組溶瘤腺病毒，其特征在于其還可操作地連接有外源基因表達(dá)盒。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的增殖型重組溶瘤腺病毒，其特征在于所述外源基因選自：

(a)干擾素類免疫調(diào)節(jié)因子的基因；

(b)白細(xì)胞介素類免疫調(diào)節(jié)因子的基因；

(c)細(xì)胞集落刺激因子的基因；

(d)抑癌基因；

(e)原癌基因的反義序列；

(f)人腫瘤表皮生長(zhǎng)因子受體家族的抗體基因；

(g)編碼抗血管生成因子的內(nèi)皮抑素、血管抑素及其片段、纖溶酶原激活因子抑制劑、Canstatin、血小板反應(yīng)蛋白的核苷酸序列；

(h)細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)因子家族的基因；

(i)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子抗體的基因；

(j)自殺基因；和

(k)腫瘤壞死因子的基因

中的至少一種。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的增殖型重組溶瘤腺病毒，其特征在于所述病毒載體為選自C亞群的2型或者5型腺病毒中的至少一種。

10.權(quán)利要求1的增殖型重組溶瘤腺病毒，其保藏日為2009年1月9日，保藏編號(hào)為CCTCC-V200903，保藏地點(diǎn)為中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心。

11.構(gòu)建權(quán)利要求2所述的增殖型重組溶瘤腺病毒的方法，其特征在于通過基因工程方法用人類B亞群11型腺病毒纖毛頭的氨基酸序列取代非11型腺病毒的纖毛頭氨基酸序列；且使所述病毒的至少一個(gè)增殖必需基因被突變或者被缺失而失去功能，或使所述病毒在增殖必需基因序列的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)與翻譯起始位點(diǎn)ATG之間可操作地插入順式作用元件，所述元件控制基因組中至少一個(gè)病毒增殖必需基因的轉(zhuǎn)錄。

12.權(quán)利要求1所述增殖型重組溶瘤腺病毒載體，其作為基因的載體而用于制備基因治療藥物。